187835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)-N-helyettesített bleomicinek és savaddiciós sóik előállítására
1 187 835 2 A vegyület A vegyüiet sorszá- rövidítése ma A rézmentes forma UV abszorpciós maximuma mp (E 1%/1 cm) A réztartalmú forma vékonyrétegkromatográfiával kapott Rf értéke *1 A réztartalmú forma elektroforézissel kapott Rm értéke (az alanin Rm értéke 1,0) *2 57. dEEDBZ-BPA 291 ( 73) 0,48 U4 58. dMCO-BPA 291 ( 87) 0,54 1,08 59. dMCO-OCT 291 ( 83) 0,42 0,96 60. dMCO-PEP 291 ( 89) 0,53 1,06 61. dMCNBZ-BPA 290 ( 81) 0,70 1,10 62. dMCNBZ-OCT 292 ( 94) 0,59 0,95 63. dMCNBZ-PEP 291 ( 93) 0,69 1,10 64. dMDDBZOBZPEP 285 ( 74) 0,09 0,93 65. dMDDBZOBZOCT 285 (' 76) 0,04 0,64 Megjegyzés: *1 „Silica Gel 60F 254 SilanisedR” (Merck Co.); metanoI-6% ammónium-acetát 60 : 40 térfogatarányú elegye kivéve a csillaggal jelölt Rf értékeket, melyeket 65 : 34 térfogatarányú elegyben kaptunk. *2 Avicel SFR (FMC Co.); hangyasav-ecetsav-víz (27 : 75 : 900 térfogatarányú elegye); 800 V, 15 perc. jük. Amint az a vizsgálati eredményekből látható, a találmány szerinti eljárással előállított (amido)N-helyettesített bleomicin-származékok általában kevésbé érzékenyek bleomicin-inaktiváló enzimre 30 mint a bleomocinek. 2. Mycobacterium smegmatis ATCC 607 és Bacillus subtilis ellen kifejtett antimikróbás hatás A címben szereplő mikroorganizmusokkal szemben kifejtett antimikróbás hatást lukasztott agar- 35 lemezen vizsgáltuk. Az aktivitás értékeket úgy adtuk meg, hogy a standard-mintaként alkalmazott bleomicin A2 (rézmentes) aktivitását 1000 meg hatékonyság/mg értékűnek tekintettük. A vizsgálat eredményeit a 3. táblázatban ismertetjük. 40 3. Tenyésztett HeLa S3 sejtekre gyakorolt növekedésgátló hatás HeLa S3 sejteket műanyag petricsészében, 10% marhaszérumot tartalmazó MÉM táptalajon inokuláltunk. Kétnapos inokulálás után a tenyészethez bleomicint adtunk. Háromnapos tenyésztés után sejtszámlálást végeztünk. A növekedésgátló hatás százalékos értékét a következő képlet szerint számítottuk: százalékos gátlás (%) = 100. (B-A)/(B-C) i képletben A jelentése a vizsgálandó minta hozzáadásától számított 3 napos tenyésztés után mért sejtszám, B a vizsgálandó minta nélküli kontrolltenyészetben mért sejtszám és C a tenyészet sejtszáma a vizsgálandó minta hozzáadásának időpontjában. Az IDS0 értéket (az 50%-os gátlásnak megfelelő koncentrációérték) a vizsgálandó minta koncentrációjának és a %-os gátlási értékeknek grafikus ábrázolásával kapott görbéről becsültük. Ezeket az eredményeket a 3. táblázatban ismertetjük. A vegyület sorszáma A vegyület rövidítése 3. Táblázat A rézmentes vegyület antimikróbás hatása (meg hatékonyság/mg) Mycobacterium smegmatis Bacillus subtilis Tenyésztett A rézmentes ATCC 607 ellen HeLaS3 sejtek forma e]]en szaporodását rezisztenciája 50%-osan gátló inaktiváló koncentráció enzimmel (ID50) mcg/ml szemben *1 1. dH-MMA 1 447 654 1,2 + + + + 2. dH-MEA 1 895 767 0,98 + + + 3. dH-IPA 2 778 593 0,95 + + + + + 4. dH-BA 6 595 579 1,10 + 5. dH-PEP 9 846 3772 1,0 + + + + 6. dH-EDA 2 396 4453 1,0 H—h H—h 7. dB2-IPA 6 425 1950 0,56 + + + + 11
