187709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás maláriaellenes antigén preparátum és vakcina előállítására
1 .187 709 2 mazékai) egyenletesen oszlik el a szabad merozoitokon, illetve a schizontákhoz van hozzákapcsolva. A szabad merozoitokkal 25.1 antitest szuszpenzióban elvégzett IIF vizsgálat során a 25.1 antitest pozitív fluoreszcenciát ad, jelezve, hogy az antigén a merozoitok felületén van. 5. példa Egerek immunizálása olyan Plasmodium yoelii antigénnel, melyet 25.1 monoklón antitesttel tisztítottunk : Antigén válasz. 5-5 BALB/c egeret immunizáltunk a 2. példa szerint, vagy az alábbi kontrol eljárás szerinti antigén fehérjével: 1. csoport: 50 pg 25.1 antigént emulgeáltunk Freund-féle komplett adjuvánsban (FCA) és intraperitoneálisan (ip) beinjektáltuk 0,2 ml mennyiségben a 0. napon. 20 pg 25.1 antigént szuszpendáltunk 0,2 ml normál egér szérumban és intravénásán beinjektáltuk a 36. napon. 25 pg 25.1 antigént konyhasó oldatban szuszpendáltunk, és intravénásán beinjektáltuk a 39. napon. 2. csoport: Csak FCA-t adtunk intraperitoneálisan a 0. napon. Csak normál egér szérumot adtunk intravénásán a 18. napon. Csak sóoldatot adtunk intravénásán a 42. napon. A 49. napon szérum mintákat vettünk titrálás és indirekt immun-fluoreszcencia vizsgálatra (IIF). Az eredmények az alábbiak voltak: Csoport Egér IIF titer Antiszérum specifikusság 1 1 > 1 : 5120 schizonták és merozoi" tok 2 > 1 : 5120 schizonták és merozoitok 3 > 1 : 5120 schizonták és merozoitok 4 > I : 5120 schizonták és merozoitok 5 > 1 : 640 schizonták és merozoitok 2 1 < 1 :40-2 < 1 : 40-3 < 1 : 40 4 < I : 40-5 < 1 :40-A 25.1 antigénnel immunizált egérből vett szérum fluoreszcens festésének képe pontosan ugyanolyan volt, mint a monoklonális 25.1 antitest által produkált szérumé. A festés a Plasmódium yoelii schizonta és merozoit formájára korlátozódott. Ez az eredmény igazolja a 2. példa szerint előállitott 25.1 antigén tisztaságát és immunogén természetét. 6. példa Egerek immunizálása olyan Plasmodium yoelii antigénnel, melyet 25.1 monoklón antigén felhasználásával tisztítottunk : Védelem a kiváltott fertőzéssel szemben. 3 csoportban 5-5 BALB/c egeret immunizáltunk a 2. példa szerint előállított antigénnel, vagy az alábbi kontrol eljárással : 1. csoport: 12 pg25.\ antigén FCA-ban emulgeálva, és intraperitoneálisan beinjektálva 0,2 ml térfogatban a 0. napon. 12 pg antigén FCA-ban, ip. úton beinjektálva a 35. napon. 20 y 25.1 antigén 0,1 ml sóoldatban, intravénásán beijektálva az 50. napon. 2. csoport: 2 pg 25.1 antigén FCA-ban, ip. úton beinjektálva a 0. napon. 2 pg 25.1 antigén FCA-ban, ip. úton beinjektálva a 35. napon. 20 pg 25.1 antigén 0,1 ml sóoldatban és ip. úton beinjektálva az 50. napon. 3. csoport: Intraperitoneálisan adagolt sóoldat FCA-ban a 0. napon. Intraperitoneálisan adagolt sóoldat FCA-ban a 35. napon. Intravénás úton beadott 0,1 ml sóoldat az 50. napon. A 60. napon szérum mintákat vettünk az antitest IIF meghatározásához és az immunprecipitációs analízishez. A 61. napon az összes egeret megfertőztük intravénás úton 104 Plasmodium yoelii-YM parazitával fertőzött erythrocytával. Az immunizált egerek antitest válaszát az 1. táblázatban közöljük. Az eredmények azt mutatják, hogy az alkalmazott feltételek mellett a 12 pg 25.1 antigénnel történő immunizálás sokkal hatékonyabb volt mint a 2 pg 25.1 antigénnel, figyelembe véve az antitest választ. 1. táblázat 25.1 antigénnel immunizált egerek antitest válasza Csoport IIF titer Antiszérum specifikusság 1 >1 : 10 240 schizonták és merozoiták 2 >1 : 5120 schizonták és merozoiták 3 <1 :40 nem specifikus A Plasmodium yoelii fertőzéssel szembeni védelem az egyes csoportoknál a 2. táblázatban látható. 2. táblázat Százalékos parazitaemia a fertőzés utáni napok függvényében. A fertőzés utáni Parasítaemia napok száma 1. csoport 2. csoport 3. csoport 4 0,5 L2 1,4 5 2 4,1 15 6 5,7 15 61 7 6,8 17,7 77 8 4,5 2,6 84 (mind elpusztult) 9 0,5 0,12 10 0,14 (0,01) 11 0,03 (0,01) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
