187461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló hatású N-nitrozo-N-(béta-klóretil)-karbamoil-peptidek előállítására
1 187 461 2 letű C-terminális tripeptidet az N-nitrozo-N(ßklóretil)-karbaminsav egy aktiv észterével - előnyösen a p-nitrofenil-észterével - acilezzük előnyösen szobahőmérsékleten 1-hidroxi-benztriazol jelenlétében. A VI képletű C-terminális tripeptidnek természetesen mindkét eljárással elkészíthetők a monokarbamoil-származékai is, ilyenkor a kiindulási tripeptid egyik aminocsoportján védőcsoportot, például 1-adamantiloxi-karbonil, 2-(p-difenil)-izopropil-oxi karbonil, célszerűen terc-butiloxikarbonilcsoportot [(CH3)j C—O—CO—] tartalmaz. A szubsztituált karbamoil-csoport beépítése után e védőcsoport az ismert módokon [például sósav/ hangyasav] szelektíven eltávolítható. A gasztrin 17 aminosavból álló polipeptidhormon, melynek C-terminális tetrapeptidje, illetve annak norleucin analógja rendelkezik a hormon jellegzetes biológiai hatásával. A C-terminális tetrapeptid szerkezetét a VIII képlet szemlélteti. E peptid, amely önmagában ismert [Nature, 207, 1356. (1956)], a melanotropin fragmensénél megadott módon a megfelelő IX képletű N-nitrozo-N-(P-klóretil)-karbamoil-származékká alakítható. A találmány szerinti módon kapott VII. és IX. képletű peptid-származékok kevésbé toxikusak, mint a kontrollként használt l,3-bisz(ß-kmlöretil)-1-nitrozo-karbamid. A találmány szerint előállított I általános képletű N-nitrozo-N-(ß-kloretil)-karbamoil-peptid-származékok tumorellenes hatását az alábbi kísérlet szemlélteti. Daganatgátló hatás L 1210 leukémiás egereknél Az állatok a tumor beoltása utáni napon a táblázatban megadott egyszeri i. p. dózisban kapták az N-nitrozo-N-(ß-kl0retil)-karbamoil-propil-valinamidot. A táblázat a mért túlélést adja meg %-ban (Ennek meghatározása az alábbi képlettel történik túlélés"/« = x 100%.) KE. T = kezelt állatok túlélése, KO.T. - kontroll állatok túlélése. Táblázat Dózis mg/kg-ban i. p. Túlélés %-ban 25 30 40 75 80 136 A találmány szerinti eljárában kiindulási anyagként alkalmazott II általános képletű, szabad aminocsoporttal rendelkező peptidek, illetve ezek NM-acíl-származékaí ismertek, illetve az ismert analógoknál megadott a peptidszintézisben általánosan alkalmazott módszerek szerint állíthatók elő. A találmány további részleteit a kiviteli példák szemléltetik a találmány korlátozásának szándéka nélkül. /. példa a, z-bisz (ß -Klóretilkarbamoil) -lizil-propil-valinamid 736 mg (1,6 mmól) lizil-propil-valinamid-diacetátot [Helv., 58, 2106. (1978)] 8 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldatot 0 °C-ra hütjük. Ezután keverés közben 0,46 ml (3,2 mmól) trietilamint és 0,34 ml (4 mmól) P-klóretil-izocianátot csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet 1 órán át 0 “C-on keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk, a desztillálási maradékot vízzel eldörzsöljük, és a kivált szilárd anyagot szűrjük, a szűrőn vízzel mossuk. A szilárd terméket exszikkátorban foszforpentoxid felett szárítjuk. Termék súlya: 480 mg (54%), Op.: 183 -185 °C, Rr: 0,75 (n-butanol-piridin-jégecet-víz 4: 1 : 1 : 1, VRK Kieselgel G, Merck). Analízis a C22H3<,N705C12 (552,5) képlet alapján: számított: C = 47, 82%; H = 7,11%; N = 17,74%; Cl = 12 81°/ talált: C =°47,90%; H = 7,60%; N = 17,41%; Cl = 13.26% 2. példa a.z hisz /N-Nitrozo-N-(fi-klóretil)-karbamoiljiizil-proli! mlinamid 460 mg (1 mmól) lizil-prolil-valinamid-diacetátot [Helv.. 58, 2106. (1978)] 6 ml vízmentes dimetilformamidban oldunk, és keverés közben 0,28 ml (2 mmól) trietilamint és 548 mg (2 mmól) N-nitrozo-ß-kloretil-karbamoil-p-nitrofenolt, majd 270 mg (2 mmól) 1-hidroxi-benztriazolt adunk hozzá. 2 óra keverés után a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot 30 ml etilacetátban oldjuk, és kétszer 5 ml vízzel kirázzuk. Az etilacetátos fázist vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük, az étert dekantáljuk, és az olajat exszikkátorban tömény kénsav felett szárítjuk. A szárítás során képződő szilárd habot szilikagéllel töltött oszlopon metanol-etilacetát 1 : 3 elegyét használva eluensként, kromatografálással tisztítjuk. A főterméket tartalmazó frakciókat öszszegyüjtjük, az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A desztillálási maradékot vízmentes petroléterrel elporitjuk, szűrjük. Termék súlya: 312 mg (51%) Rf: 0,80 (metanol-etilacetát 1 : 3, VRK Kieselgel G, Merck). Rf: 0,88 (etilacetát-piridi.n-jégecet-víz 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
