187390. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-oxo-delta1,4-szteroid-származékok előállítására
teres Erlenmayer-lombikban levő 1 liter steril tápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 "C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápközeget beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 ‘C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 -fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. c) 15 g 6a-fluor-l lß,21-dihidroxi-16a-metiI-4- pregnen-3,20-diont feloldunk 300 ml hexametilfoszforsav-triamidban, majd az oldatot sterilre szüljük. d) 12 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 12 g ammónium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb pH = 6,5 értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril tápközeget, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml lPluronic, pH = 7 értékre beállítva. Ezt beoltjuk 3 liter Arthrobacter simplex előtenyészettel /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 6 órán keresztül 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja szerint előállított steril 6a-fluor-llß,21-dihidroxi- 16a-metil-4-pregnen-3,20-dion-oldatot, és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. A fermentációt ezután még 22 órán keresztül folytatjuk. A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 'C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából aluminium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 13,1 g 6a-fluor-llß,21-dihidroxi-16ametil-l,4-pregnadien-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 180/181—182 *C. 6. Példa a) Arthrobacter simplex ATCC 6946 törzs száraz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk egy kétliteres Erlenmayer-lombikban levő i liter steril tápközeget, melynek Összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott táptalajt 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápköze- - get beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 *C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0.05% glükóz-monohidrát, 0,1- % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. c) 15 g 11 ß,21 -dihidroxi-16a, 17a-izopropilidéndioxi-4-pregnen-3,20-diont feloldunk 300 ml etilénglikol-monometil-éterben, majd az oldatot sterilre szüljük. d) 12 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 12 g ammónium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb pH = 6,5 értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril tápközeget, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékrek beállítva. Ezt beoltjuk 3 liter Arthrobacter simplex előtenyészetével /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 6 órán keresztül 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja szerint előállított steril llß,21-dihidroxi-16a, 17aizopropilidén-dioxi-4-pregnen-3,20-dion-oldatot és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. Ezután a fermentációt még 20 órán keresztül folytatjuk. A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három Ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 *C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából aluminium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 13,6 g 1 lß,21-dihidroxi-16a, 17a-izopropilidén-dioxi-1,4-pregnadién-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 241-242,5 *C. 7. Példa a) Arthrobacter simplex ATCC 6946 törzs száraz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk eg', kétliteres Erlenmayer-lombikban levő 1 liter steril Ápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50-55 60
