187258. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású vegyületek előállítására
25 187258 26 mérsékleten keverjük. Ezután hagyjuk lassan szobahőmérsékletre melegedni, és hozzáadunk körülbelül ugyanannyi etil-acetátot, amennyi a reakcióelegy térfogata. Az elegyet lehűtjük, nátrium-kloriddal telitett tömény sósav-oldattal semlegesítjük. A szerves fázist háromszor kimossuk a telítettnél valamivel hígabb nátrium-klorid-oldattal (5 térfogatrész telitett nátrium-klorid-oldatot egy térfogatrész vízzel hígítunk). Ha a kirázás során három fázist észlelünk, akkor a középső fázist egyesítjük az alsó, vizes fázissal. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Az egyesített vizes fázist és középső fázist 0 °C hőmérsékleten tömény sósavval pH = 2-re savanyítjuk, és etil-acetáttal háromszor kirázzuk. A szerves fázist telitett nátrium-klorid-oldattal háromszor mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon tiszta, olajos terméket nyerünk. Op.: 151-152 °C. Rfi = 0,65, Rn = 0,78, Ro = 0,68. 90. példa N-[2-(N-Benzoil-L-fenil-alanil-merkapto-propionil)]-L-3,4-dehidro-prolin 213 mg (1 millimól) Boc-D-3,4-dehidro-prolint 1 ml trifluor-ecetsavval 1 órán át kezelve lehasítjuk róla a védócsoportot. Utána hozzáadunk 3 ml vízmentes dietil-étert, és az oldószereket csökkentett nyomáson, 30 °C hőmérsékleten ledesztilláljuk. A maradékot dietil-éterrel háromszor mossuk, és csökkentett nyomású szárító edényben (exszikkátorban) nátrium-hidroxid fölött megszárítjuk. 358 mg (1 millimól), a 89. példában leírt módon nyert 2-(N-benzoil-L-fenil-alanil-merkapto)-propionsav 3 ml kétszer desztillált dimetil-formamiddal készült oldatát száraz jég és aceton elegyében -20 °C hőmérsékletre hűtjük, és -10 - -15 °C közötti hőmérsékleten hozzácsepegtetjük 171 mg (1,05 millimól) l,l’-karbonil-diimidazol 1 ml kétszer desztillált dimetil-formamiddal készült oldatát, majd az elegyet 2 órán át keverjük. Utána hozzáadjuk az L-3,4-dehidro-prolin-trifluor-acetát 2 ml dimetil-formamiddal készült, trietil-aminnal semlegesített, lehűtött oldatát. Ezután hagyjuk az elegyet szobahőmérsékletre melegedni, az oldószert nagymértékben csökkentett nyomáson, 35 °C hőmérsékleten ledesztilláljuk, és a maradékot feloldjuk 10 ml etil-acetát és 2 ml víz elegyében. Az elegyet 0 °C hőmérsékleten, 1 normál sósav-oldattal pH = 2-re savanyítjuk, a szerves fázist elválasztjuk, és félretesszük, és a vizes fázist további háromszor 5 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesített szerves fázisokat kétszer vízzel, majd telített nátrium-klorid-oldattal 14 háromszor mossuk, aktívszénnel derítjük, vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon olajos anyag formájában 366 mg terméket nyerünk. E2t a terméket kromatográfiás úton (Sephadex LH-201", oszlopméret: 1,2 x 98 cm, eluens: metanol) tisztítjuk. 1-1 frakcióban 150 cseppet gyűjtünk (2,9 ml). A kívánt termék a 24-29. frakciókban van, ezekről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A terméket újra kromatografálva tovább tisztítjuk (Sephadex LH-20**, eluens: izopropanol). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A 2. és 3. számú futtatóele gyek ben vékonyrétegen kromatografálva a termék 95%-os tisztaságúnak bizonyul. Rf2 = 0,73, Ro = 0,615. 91. példa A fentiekben leírt módon előállított különböző vegyületek in vitro enzimgátló hatását az 1. példában leírt meghatározási módszerrel mérjük. Az enzimkészítményt emberi vizeletből Ryan, J.W. és munkatársai [Tissue and Cell 10, 555 (1978)] módszerével izoláljuk, és tisztítjuk. A vegyületek gátló hatásának jellemzésére használt Iso-érték az inhibitor (gátló anyag) azon koncentrációja, amely az enzimet 50%-ban gátolja a standard meghatározási körülmények között, a szubsztrátot (az enzim által átalakított anyagot) annak K«-értékénél lényegesen kisebb koncentrációban tartalmazó rendszerben. Az 1. táblázatban megadjuk a találmány szerinti néhány vegyület Iso-értékét. 1 táblázat Vegyület Iso (példa száma) 13. 2,6 X 10-8 M 24. 3,4 X 10-8 M 35. 7,5 X IO'9 M 45. 8,8 X io-9 M 59. 2,5 X io-8 M 60. 1,5 X io-« M 77. 9,4 X io-9 M 80. 2,5 X 10-8 M 81. 7,5 X 10-9 M 90. (racém) 3 X 10-9 M 92. példa A találmány szerinti egyes vegyületek orális (szájon át adagolva mért) hatékonysága r, 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
