187152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklodextrin glikoziltranszferáz enzim immobilizálására
1 187 152 2 mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,2 g immobilizált CGTáz. Aktivitás: 147 Kitahata egység/g xero-0,13 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 tnekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 5 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 5,5) szuszpendáltunk, majd 0 “C-on - állandó kevertetés közben - hozzáadtunk 0,25 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot, amelyet előzőleg 5 ml hideg ( + 4 °C) 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 5,5) oldottunk fel. 10 perc további kevertetés után, a reakcióelegyhez 11 ml CGTáz oldatot (11,4 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 5,5-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt centrifugálással elválasztottuk és háromszor 30 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 5,5), háromszor 30 ml - 1 mól nátriumkloridot tartalmazó - 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 5,5), majd háromszor 30 ml nátrium-acetát pufferrel (pH = 5,5) mostuk. Végül a gélt háromszor 60 ml disztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,2 g immobilizált CGTáz. Aktivitás: 235 Kitahataegység/gxerogél. 6. példa 0,13 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacítása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 5 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 6,0) szuszpendáltunk, majd 0 °C-on - állandó kevertetés közben - hozzáadtunk 0,26 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot, amelyet előzőleg 5 ml hideg ( + 4 °C) 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 6,0) oldottunk fel. 10 perc további kevertetés után, a reakcióelegyhez 13 ml CGTáz oldatot (10 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 6,0-ra állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után, a gélt centrifugálással elválasztottuk és háromszor 30 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,0), háromszor 30 ml - 1 mól nátriumkloridot tartalmazó - 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,0), majd háromszor 30 ml nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,0) mostuk. Végül a gélt háromszor 60 ml desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,2 g immobilizált CGTáz. Aktivitás: 380 Kitahata egység/g xerogél. 7. példa 0,13 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 5 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 6,5) szuszpendáltunk, majd 0 °C-on - állandó kevertetés közben - hozzáadtunk 0,26 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot, amelyet előzőleg 5 ml hideg ( + 4 °C) 0,05 mólos nátrium-acetát pufferben (pH = 6,5) oldottunk fel. 10 perc további kevertetés után, a reakcióelegyhez 13 ml CGTáz oldatot (10 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 6,5-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a szuszpenziót. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt centrifugálással elválasztottuk és háromszor 30 ml 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,5), háromszor 30 ml - 1 mól nátriumkloridot tartalmazó - 0,05 mólos nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,5), majd háromszor 30 ml nátrium-acetát pufferrel (pH = 6,5) mostuk. Végül a gélt háromszor 60 ml desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 0,2 g immobilizált CGTáz. Aktivitás : 450 Kitahata egység/g xerogél. 8. példa 1 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 24 ml 0,05 mólos nátrium-acetát oldalban (pH = 7,0) szuszpendáltunk, majd 0 °C-on - állandó kevertetés közben - hozzáadtunk 2 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)-etil]karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot, amelyet előzőleg 15 ml hideg ( + 4 °C) 0,05 mólos nátriumacetát oldatban (pH = 7,0) vettünk fel. 10 perc további kevertetés után, a reakcióelegyhez 113 ml CGTáz oldatot (12 mg/ml) adtunk, majd a reakcióelegy pH-ját 7,0-re állítottuk. A teljes reakcióidő - 0-4 °C-on - 48 óra volt, amelyből kétszer 6 órát kevertettük a reakcióelegyet. A reakció kezdetén félóránként, később óránként ellenőriztük a pH-t, és szükség esetén korrigáltuk. A reakció befejeződése után a gélt centrifugálással elválasztottuk és háromszor 300 ml 0,05 mólos nátrium-acetát oldattal (pH = 7,0), háromszor 300 ml - 1 mól nátriumkloridot tartalmazó - 0,05 mólos nátrium-acetát oldattal (pH = 7,0), majd háromszor 300 ml nátrium-acetát oldattal (pH = 7,0) mostuk. Végül a gélt háromszor 300 ml desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. Kitermelés: 1,5 g immobilizált CGTáz. Aktivitás: 366 Kitahata egység/g xerogél. 9. példa 0,2 g Akrilex C-100 xerogélt, amelynek kötőkapacitása (—COOH-tartalma) 6,2 mekv/g, szemcsenagysága 100-320 pm volt, 5 ml nátrium-acetát oldatban (pH = 7,5) szuszpendáltunk, majd 0 °C- on - állandó kevertetés közben - hozzáadtunk 0,4 g N-ciklohexil-N'-[2-(4-morfolinil)-etil]-karbodiimid-metil-p-toluol-szulfonátot, amelyet előzőleg 5 ml hideg ( + 4 °C) 0,05 mólos nátrium-acetát oldatban (pH = 7,5) vettünk fel. 10 perc további kevertetés után, a reakcióelegyhez 21,6 ml CGTáz oldatot (12 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
