186877. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, luteinizáló hormont felszabadító hormon antagonisták és savaddiciós sóik előállítására
I 186877 2 K) eljárás Az A) eljárással előállítóit gyanta megfelelő N- terminális szukcinil-származékát 0,75 g A) eljárással nyert gyanta és 30 ml metilén-kloridos imidazoí- és szukcinil-klorid-oldat 30 perces reakciójával nyerjük. Ezután az acilezstt peptid-gyantát metilén-klcriddal és metil-alkohollal mossuk, majd vákuumban szárítjuk. A következő példák a találmány szerinti eljárás további megvilágítására szolgálnak. A példákban az oldószerelegyekkel kapcsolatosan megadott arányok az egyes oldószerek relatív térfogat-arányait jelentik. /. Példa N-Ac~[D-4-CI-Phe1-2 D-Trp3, D-Arg6, D-Ata10J-LH-RH előállítása a dekapeptid védőcsoportjainak eltávolítását ez N-acetil-csoport kivételével - és lehasitását az előbbiekben ismertetett gyantáról (lásd az A) és á) eljárással előállított gyantát) 1,96 g gyantának 40 mi hidrogén-fluoriddal, 10 ml anizollal és 100 mg [,4-ditiotreitollal 0 °C hőmérsékleten 1 órán át történő kezelésével végezzük el. A hidrogén-fiuoridot nitrogénáramban távolítjuk el és a pepiidet éter hozzáadásával kicsapjuk. A nyers pepiidet 50%-os ecetsavval extraháljuk. Az extraktumot 2,5 • 95 cm méretű, analitikai tisztaságú Sephadex G-25 márkanéven forgalomban lévő kémiailag módosított keresztkötéses dcxtránnal töltött oszlopon gélszűréssel tisztítjuk, oldószerként 50%-os ccetsavat alkalmazunk. Azokat a frakciókat, amelyek 280 mm-en nagyobb UV adszorpciós csúcsot adnak összegyűjtjük és szárazra pároljuk. Az így kapott olajos maradékot 2,5 • 45 cm méretű, sziiikagéihez kötött oktadecil-szilánnal töltő oszlopra visszük, majd 10—40%-ig növekvő mennyiségű n-propanoit tartalmazó 20%-os htdrogénkloridban oldott 0,1 rnoi/'l ammonium acetáttal, lineáris gradiens elúcióval oldjuk le. A fő csúcsot képező anyagot összegyűjtjük, bepároljuk, a kapott olajat híg ecetsavban liofilizáljuk; 232 mg cím szerinti vegyületet kapunk fehér por formájában. A termék szilikagél-vékonyrétegen, 0,2-0,3 mg anyag felvitelével, 4 különböző oldószerrendszeroen végzett vizsgálat alapján - a foltokat Cl2-keményítő reagenssel és Ehrlich-reagenssel láthatóvá téve - homogénnek bizonyult. A különböző oldószerrendszerekben a következő Rf értékeket kaptuk: A) 1-butanol : ecetsav : víz (4 : 1 : 1), 0,43; B) ctii-acetát : piridin : ecetsav : viz (20 : 5 : 1 : 3), o,12; C) 2-propanol : 1 M mol/1 ecetsav (2: 1), 0,43; D) 1-butanol : ecetsav : víz : etil-acetát .1:1:1: 1), 0,64. Aminosavanalízissel a következő összetételi adatokat kaptuk: szerin, 0,80; prolin, 0,97; alanin, 1,00; leucin, 1,03; tirozin, 1,00; 4-klórfenil, 2,00; triptofán, 0,66; arginin, 1,81. 2. példa N-Ac-[D-3-(2-naftil)-Ala\ D-4-Cl-Phe2, DTrp3, D-Arg6, D-Ala10J-LH-RH előállítása A cím szerinti vegyületet az E) vagy az F) eljárás szerint előállított gyantából az 1. példában leírt módon állítjuk elő. A nyers pepiidet az 1. példában ismertetett extrakciós és kromatográfiás eljárásokkal tisztítjuk. Butanol : ecetsav : víz = 4 : 1 : 1 oldószerben SiÖ2-n Rf = 0,36. 3. példa N-Ac-[D-4-Cl-Phe'-2, D-Trp3, D-Lys6, DAla'°J-LH-RH előállítása A védőcsoportok eltávolítását - az N-acetilcsoport kivételével - és a dekapeptid lehasitását a gyantáról (lásd a D) eljárással előállított gyantát) az 1. példában ismertetettel azonos körülmények között végezzük. A nyers peptidet az 1. példában ismertetett extrakciós és kromatográfiás eljárások alkalmazásával tisztítjuk. Butanol : ecetsav : víz : etil-acetát = — 1 : 1 : 1 ; 1 oldószerrendszerben Si02-n Rf = 0,59. \ példa N-Ac-[D-3-(2-naftil)-Alal, D-4-Cl-Phe2, DTrp3, D-Lys6, D-Aly10J-LH-RH előállítása A védőcscportok eltávolítását - az N-acetilcsoport kivételével - és a dekapeptid lehasitását a gyantáról (lásd a H) eljárással előállított gyantát) az 1. példában ismertetettel azonos körülmények közölt végezzük. A nyers peptidet az l. példában ismertetett extrakciós és kromatográfiás eljárások alkalmazásával tisztítjuk. Butanol : ecetsav : víz = 4:1:1 oldószerrendszerben Si02-n Rf = 0,40. 5. példa Az 1. példában ismertetett eljárással a következő peptideket állítjuk elő: [D-4-CI-Phe1-2, D-Trp3, D-Argö, D-Ala10]-LHRH, [D-4-Cl-Phe1-2, D-Trp3, D-Lys6, D-Ala10]LH-RH,«N-Suc-[D-4-Cl-Phe1,2, D-Trp3, D-Arg6, D-Aia10]-LH-RH, N-Ac-[D-4-Cl-Phe'-2, D-Trp3, D-His6, D-Ala'°]-LH-RH, butanol : ecetsav : víz : etil-acetát = 1 : 1: 1 : 1 oldószerrendszerben Si02-n Rr = 0,65, N-Ac-[D4-CI-Phe'2, D-Trp3, D-Arg6]-LH-RH, butanol : ecetsav : víz = 4:1:1 oldószerrendszerben Si02-n Rr = 0,41 N-Ac-Gly-fD-4-Cl-Phe1-2, D-Trp3, D-Arg6, DAla'°]-LH-RH, N-Ac-[D-Phe>, D-4-F-Phe2, DTrp3, D-Arg6, D-Ala10]-LH-RH, N-Ac-fD-4-Cl-Phe1-2, D-Trp3, D-Orn6-D-Ala10]LH-RH, butanol : ecetsav : víz = 4:1:1 oldószerrendszerben Si02-n Rf = 0,34 N-Ac-[D-4-Cl-Phe12, D-naftil-Ala3, D-Lys6-DAla10j-LH-RH, N-Ac-fD-Trp1, D-4-Cl-Phe2, DTrp3, D-Arg6, D-AlaI0]-LH-RH, butanol : ecetsav : víz : etil-acetát = 1 : 1 : 1 : 1 oldószerrendszerben Si02-n Rf = 0,58, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
