186749. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, biológiailag aktív peptidek előállítására
1 186 749 2 pároljuk. A maradékhoz tetrahidrofuránt adunk, és a szűrt oldatot meg egyszer vákuumban bepároljuk. A terméket metanol és dietiléter elegyéből kristályosítjuk. 1,1 g cím szerinti terméket kapunk. Op.: 138 °C; [a]?.5 = = -58,9 ° (c = 1. metanol); =0,15, R? =0,33. 2. lépés: H-Pro-Ser-NH2 °CF3COOH (11) 1.0 g (3,3 mmól) Boc-Pro-Ser-NH2 (I) 0 °C-on 10 ml trifluorecetsawal készített oldatát 0 °C-on 30 percen át állni hagyjuk, utána vákuumban bepároljuk. A maradékot metanolban oldjuk, és az oldatot vákuumban bepároljuk. A terméket dietiléter és petroléter elegyéből kristályosítjuk. 1,0 g (II) képletű vegyületet kapunk. Op.: 48-50 °C,Rf = 0,10. 3. lépés: Boc-Tyr(BzI)-Pro-Ser-NII2 (Hl) A 2. lépés szerint kapott termék 1,0 g-ját (3,2 mmól) 35 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldatot 0 °C-ra hú'tjük, majd 0,36 ml (3,2 mmól) N-metil-morfo!int, utána 1,2 g (3,2 mmól) Boe-Tyr(üzl)-OH-t, 0,43 g (3,2 mmól) l-hidroxi-benzotriazolt és 0,73 g (3,52 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 0 °Con egy órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük, utána szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk- A maradékot etiiacetátban oldjuk, és az oldatot citromsav nátriumkloriddal telített 1 M oldatával, utána nátriumhidrogénkarbonáí nátriumkloriddal telített 1 M oldatával, végül vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes náíriumszulfátta! szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Etilacetát és petroléter elegyéből kristályosítva 1,4 g (III) képletű terméket kapunk. Op.: 115 °C; [Q^5 = -22,9° (c = 1, metanol); rA = 0,20. 4. lépés: H-Tyr(Bzl)-Pro-Ser-N! 12 « CF3COOI1 (IV) 1.0 g (1,8 mmól) Bce-Tyr(özl)-Pro-Ser-NH2 -t a 2. lépésben leírtak szerint reagáltaíunk. 1,0 g cím szerinti terméket kapunk. Op.; 54-57 °C (bomlás); [a]2D5 = —7,4e (c = 1. metanol); R^- = 0,59. 5. lépés: Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (V) 1,3 g (3,8 mmól) Bee Phe-OH 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához 0 °C-on 0,42 ml (3,8 mmól) N-nietil-morfoIint, majd 0,3 ml (3,8 mmól) etilklórformiátot adunk. A reakcióelegyet 0 °C-on 2 percen át keverjük, majd 0,95 g (3,7 mmól) H-GIy-NH-NZZ*HC1 (K. Hofman et al.: J. Amer. Chem. Soc. 94 6171 [1972]) es 0,4 m! (3,7 mmól) N-metil-morfolin 15 ml dimetilfovmamiddal készített, hűtött oldatát adjuk hozzá. Az elegyet -10 °C-on 3 órán át, utána 20 °C-on egy órán át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és a színleld vákuumban bepároljuk. A maradékot etiiacetátban oldjuk és az oldatot többszörösen citromsav nátriumkloriddal telített 1M oldatával, nátriumhldrogénkarbonát nátriumkloriddal telített 1M oldatával és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Metanol és diizopropiléter elegyéből kristályosítva 1,4 g cím szerinti terméket kapunk, Op.: 143 °C [aji5 = +5,6° (c = 1. metanol). =0,63. 6.lépés: H-Phc-Cly-N; 1 N11-Z-ÜC1 (VI) 1.0 g (2,1 mmól) (V) képletű vegyületet 10 percen át szobahőmérsékleten 10 m! jégecetes 1,3 n sósav-oldattal kezelünk. Az oldószert 30 C-on vákuumban eltávolítjuk és a maradékot dietiléterrel eldörzsöljük. 0,89 g (VI) képletű cím szerinti vegyületet kapunk. Op.: 178 °C; [al‘o = +45° (c = 1. metanol). Rp = 0,78. 7. lépés: Boc-aia-Phe-Gly-NH-NH-Z (VII) 1.0 g (5,3 mmól) Boc-ala-OH-t és 2,09 (5,1 mmól) H-Phe-Gly-NH-NH-Z” HCl-t az 5. lépésben leírtak szerint reagáltaíunk. Metanol és diizopropiiéter elegyéből kristályosítva 2,5 g (Vll) képletű cím szerinti vegyületet kapunk. Op.: 165 °C, [a]?L5 = +8° (c = 1. metanol), Rj) = = 0,51. «.lépés: H-aía-Phe-Giy-NH-NH-Z = HCI (Vili) A 7. lépés szerint kapott Boc-aja-Plie-Gly-NH-NH-Z 1,0 g-jáiói kiindulva a 6. lépésben leírtak szerint járunk el. 0,84 g cím szerinti (VIII) képletű vegyületet kapunk, amely 180 °C-on olvad, [ajp = 0,2° (c = 1. metanol). Rp =0.75, 9.lépés; Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX) 1.0 g (3,5 mmól) Boc-Tyr-OH és 1,65 g (3,4 mmól) H-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z* HCI reakciója útján 2,24 g (IX) képletű vegyületet kapunk. Op.: 148 °C (metanol-diizopropiléter). [aj?,5 = +16,2° (c — 1. metanol). R^ = = 0,38. 10. lépés: Boc-Tyr-aja-Phe-Gly-NH-NH2 (X) A 9. iépés szerint kapott Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NHZ 1,0 g-jűt (1,4 minő!) 10 ml metanolban szobahőmérsékleten 0,27 g 10/ó-os palládium-aktívszén jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szürletet vákuumban betöményítjük. Etilacetát hozzáadására a termék kiválik. Hozam: 0,64 g; Op.: 148 °C. [a]” = =r+26,6°; (c = 1. metanol). = 0,34. 11. lépes: Boc-Tyr-a]a-Phc-Glv-Tyr(BzÍ)-Pro-Ser-NII2 (X!) 2.0 g (3,5 mmól) Boc-Tyr-ala-Plie-Gly-NH-NHj 20 ml vízmentes dimetilformamidda! készített oldatához vízmentes tetrahidrofuránnal készített 4 n hidrogénldoridoldalból 2,18 ml-t, majd 0,45 ml (3,85 mmól) n-buülnitrilet adunk -30 °C-on. A reakcióelegyet -30 °C-on 30 percen át keverjük, majd 1 in! (8,75 mmól) N-metil-morfo’int és utána 1,66 g (2,91 mmól) H-Tyr(Bz!)-Pro-Ser- NH2 ’ CF3COOH (IV) és 0,33 ml (2,91 mmól) N-metilmorfolin 40 ml dimetilformamiddal készített, —30 °C-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet —9 °C-on 3 napig állni hagyjuk, utána a sókat kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk es a terméket metanol, etilacetát és dietiléter elegyéből kristályosítjuk. A nyers terméket Siükngéilei (Merck. 70 -230 mesh) végzett oszlopkronvdtográfiáva.i tisztítjuk, etilacetát és metanol 8 ; 2 aiányban készített elegy ével cluálva. 2,0 g terméket kapunk, amely 135 °C-on oivad. [a]?.5 = -5,3 ° (c = 1. metanol). Rf =0.24. 12. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHj (XII) 1,3 g (1,3 mmól) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr(BzI)-Pro-Ser-NHj • CTVCOOH (XI) 20 ml metanollal készített oldatát 35 °C-on 0,30 g 10 7c-o$ palládium-csontszén jelenlétéhen hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük és a szürletet vákuumban betöményítjük Dietiléter hozzáadására 1,1 g cím szerinti terméket kapunk, amely 160— 163 °C-on bomlás közben olvad. [ajpS =—7,6° (c = 1, metanol), = 0,11. Rf" =0,80. 13. lépés: H-Tyr-ala-Phc-GIy-Tyr-Pro-Ser-NH2 (XIII) A 12. lépésben kapott (XII) képletű Boc-Tyr-aia-Phe-GlyTyr Prc-Scr-NHj 1,0 g-játOJ mól) 0 °C-on 30 percen 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
