186729. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pentapeptid-származékok előállítására
1 186 729 2 b) Az aminosavészíer-hidrokloridokat tercier bázis, előnyösen trietil-amin vagyNMM hozzáadásával alakítottuk át szabad észterekké. c) Ha a kondenzálás során a részleges kondenzációhoz olyan peptidre volt szükség, melynek optikailag aktív C-terminális aminosavgyöke van, HOBT-t adtunk az elegyhez. d) A kondenzálást 24 órás reakcióidővel, +4 °C hőmérsékleten hajtottuk végre. e) A kondenzálás után a termék tisztítását savas és lúgos mosással hajtottuk végre, hogy eltávolítsuk a reagáiatlan vegyszereket. f) A lúgos elszappanosítási vizes metanolban, 11,5— 12,0 pH-n hajtottuk végre nátrium-hidroxiddal, autotitrátorban. g) A benzil-oxi-karbonil védőcsoportot metanol és ecetsav oldószerelegyben, 10 % palládiumot tartalmazó, aktív szénre felvitt palládium katalizátorra! végzett hidrogenolízissel távolítottuk el. h) A fenti hidrolízis során kapott acetátot a megfelelő iiidrokloriddá metanolos hidrogén-klorid hozzáadásával alakítottuk át, i) A benzi! védőcsoportokat metanolban 10% palládiumot tartalmazó aktív szénre felvitt palládium katalizátorral végrehajtott hidrogenolízissel távolítottuk el. j) A terc-butil és terc-butoxikarbonil védőcsoportokat ecetsavban, ! n sósavoldatta! kezelve távolítottuk el, anizoi jelenlétében, 60-90 perc reakcióidővel. k) A treonin és szerin alkohoicsoportjait védő OBu védőcsoportokat 10 % vizet tartalmazó trífluorecetsawal kezelve távolítottuk el, 60-90 perc reakcióidővel. !) A kapott peptideket hidrokiorkljuk formájában izoláltuk és vizes oldatukból liofilizáltuk. 1. példa H-Tyr-/}-Met-Gly-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítása A pepiidet az 1. ábrán vázolt módon állítjuk elő, hidrokiorid sója formájában izoláljuk cs karboximetilccllulózon (CMC 52) tisztítjuk; a fokozatos eluálást 0,001-0,5 mol/1 ammónium-acetát oldatokkal végezzük. A hozam 56,7 %. A vizes oldatból üofilizált acélát savaddíciós só jellemző adatai: Rf: 0,522; 0,833; 0,478; [aJÍ5: +8,1° (c = 0,2, metanolban). Az 1. példában ismertetett eljárás 1. ábrán ismertetett reakcióvázlatának egyes iépései az alábbi hozamokkal végezhetők el: 1. lépés 84 %; 2. lépés 99 %; 3. lépés 91 % ; 4. lépés 89 % ; 5. lépes 91 %; 6. lépés 92,5 %; la lépés 91 % ; 2a lépés 93 %. A teljes reakciósor 56,7 %-os hozammal végezhető el. 2. példa H-Tyr-D-Met(0)-G!y-Phe(4-N02)-Pro-NH2 előállítására A cím szerinti pepiidet az 1. példában kapott acetát savaddíciós sóból jégecetben végrehajtott hidrogén-peroxidos oxidálással állítjuk elő. A hozam 100 %. A vizes oldatból üofilizált acetát savaddíciós só jellemző adatai a következők : Rf: 0.402; Ü,ó84; ja]íf: +6,1° (c = 0,12, metanolban). Az ezekben a példákban leírt peptidekke! analóg módon állítottuk elő a következő peptideket, melyek jellemző adatait is feltüntettük. A C-terminális származékokat a szokásnak megfelelően jelöltük, a következőképpen:-NH2 amid-NHEt etil-amid-GMe metil-észter A. DL aminosavakat Çolescott és munkatársai módszerével [J. A. C. S., 79., 4232 (1957)] állítottuk elő. Az egyes reakciókat feltüntettük az A reakcióvázlaton és a vegyületek számozása megfelel az ezen publikációban használt nak. Mindegyik előállított DL aminosavat acetileztük és sertésvese-acilázzal rezolváituk [Biochim. Biophys. Acta, 148., 414 (1967) és Helv. Chim., Acta, 59., 2181 (1976)]. A reakciót a B rcakcióvázlaíon szemléltettük. Az L-aminosavakat terc-butil-oxi-karboni! származékaikká alakítottuk és a peptidkémiában általánosan alkalmazott módszerekkel beépítettük a peptidláncba. A módszer általános vázlata az 1. ábrán látható. A különböző összakapcsolási lépéseket vagy DCC1/HOBT reagenssel, vagy a vegyes anhidrid-eljárással hajtottuk végre. Az L-(-)-pipeko!insav származékainak [L-(~)-hexahidropiridin-2-karbonsav] előállítását a 2. ábra szemlélteti. A pikolinsav pipekolinsavvá alakítása megtalálható: H., C. Beyerman Recueil, 78., 134 (1959). Az L-(~)-pipckolinsav jellemző adatai: op. 268 °C, [ö]2®-26.6° (c = 2,58, vízben). Az L-(-)-pipekoiinsav átalakítása megtalálható a következő irodalmi helyen: E. Schanabeí Liebigs Ann. Chem., 702., 188 (1967). Ez a publikáció az általános eljárást ismerteti, melynek alapján az L-(~)-pipekc'insavat BOC-L-(-)-pipekolinsawá alakíthatjuk. A /3-homoprolin (pirrolidin-2-ecetsav) származékainak előállítását a 3. ábra szemlélteti. A BOC-L-prolint M. A. Ondetti és S. L. Engel: J. Med. Chem., 18., 761 (1975) szerint állítottuk elő. A BOC-L-homoprolint a fentebb leírt vegyes anhidrid-eljárással alakítjuk át BOC-L-homoPro-NH2-dá, amelyből 1 n sósavval ecetsavban végzett reakcióval (a védőcsoport eltávolítása) L-homoPro-NH; .HCl-ot kapunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5G 55 6C 6
