186514. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(1,3-dihidroxi-2-propoxi-metil)-guanin előállítására
1 2 186.514 steril körülmények között csomagoljuk. Az alábbi gyógyszerkészítmény alkalmas intravénás befecskendezésre. C) ív. gyógyszerkészítmény Hatóanyag 0,5 g 0,9%-os nátrlumklorid -oldat 100 g A hatóanyagot hozzáadjuk 100 ml 0,9%-os nátriumklorid-oldathoz és keverés közben oldjuk. Az oldatot 0,2 mikron pórusméretű membránszűrőn át szűrjük, és steril körülmények között csomagoljuk, így 100 ml, intravénásán befecskendezhető oldatot kapunk. D) Tabletta Hatóanyag 200 súlyrész Magnézium-sztearát 3 súlyrész Keményítő 30 súlyrész Laktóz ' 116 súlyrész PVP (polivinilpirrolidon) 3 súlyrész A felsorolt komponenseket összekeverjük és granuláljuk, oldósszerként metanolt használva. A készítményt szárítjuk, és alkalmas tablettázó gép segítségével tablettázzuk. Egy-egy tabletta 200 mg hatóanyagot tartalmaz. 10 15 20 10. példa Az (I) képletű vegyület kivételes vírusellenes hatását az alábbi teszten mutatjuk be. Mesterséges fertőzéshez Herpes simplex vírus 2 G törzset tenyésztettünk HEp-2 sejttenyészeteken. A vírus 1 óra alatt megkötődött, majd friss táptalajt vittünk a sejtekre, és 35 °C-on addig inkubáltuk, amíg az összes sejt meg nem lett fertőzve. A sejtszuszpenziót -70 °C-on megfagyasztottuk, majd megolvasztottuk és centrifugáltuk a sejttörmelék eltávolítására. A fel ül úszó folyadékot alikvot részekre osztottuk, és felhasználásig megfagyasztva tároltuk -70 °C- on. A felülúszó folyadék 106,7-szeres hígítása a sejttenyészet 50%-os fertőző dózisát (CCID50) biztosította HEp-2 sejteken, 103 7-eszeres hígítása pedig egéren bizonyult 50%-os halálos dózisnak (LDS 0). 20-20 darab, 15-17 g testsúlyú svájci Webster nőstényegérből álló csoportokat megfertőztünk 02 ml EMEM intraperitoneális beadásával. A 0,2 ml mennyiség 10 LDso vírusnak felelt meg. A 10 LDS0 vírusmennyiségnél 10° 5 -szer több vagy kevesebb vírus szolgált a virulencia ellenőrzésére, annak biztosítására, hogy az alkalmazott modell megfelelő. A megfertőzés után 6 órával kezdtük meg a kezelést a vizsgált vegyületekkel. A 20-20 állatból álló csoportokra osztott egereknek 5 mg/kg, 10 mg/kg, illetve 20 mg/kg dózisban adtuk be a vegyületeket fiziológiás sóoldatban szubkután. A szintén 20 állatból álló kontroll csoportnak fiziológiás sóoldatot adtunk be szubkután. A kezelést megismételtük a fertőzést követő 24,48,72 és 96 óra elteltével. A teszt során az (I) képletű vegyületet vizsgáltuk a 4.199.574. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban szereplő három olyan vegyület tel együtt, amelyek kémiai szerkezete részben nasonlít az (I) képletű vegyületre. 25 30 35 40 45 50 55 60 Vizsgált vegyület Dózi« Túlélők száma 20 állatbél mg/kg 12 14 21 nappal a fertőzi« után Kezeletlen kontroll 0 0 0 9-(l 3-dibenzoxi-2-5 2 2 2-propoxi-metil)-adenin 10 1 0 0 20 1 1 1 9-(l ,3-dibenzoxi-2-5 2 0 0 -propoxi-metil)~6-10 0 0 0 -merkapto-purin • 10 1 0 0 9-(l-hidroxi-2-5 1 1 1-etoxi-metil)-guanin 10 3 3 3 20 5 4 4 9-(l ,3-dihidroxi-2-5 15 14 14 -propoxi-metil)-10 19 18 18-guanin 20 19 18 15 Ha a fenti eredményeknél összehasonlítjuk a túlélő állatok számát az (I) képletű vegyület alkalmazásánál az ismert vegyületek adagolásánál tapasztalt túlélések számával, világosan kiderül az új vegyület lényegesen nagyobb vírusellenes hatása. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) kénWű 9-(l ß-dilüdroxi-2-propoxi-metil)-guanin és gyógyászati szempontból elfogadható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a) valamely (IX) általános képletű vegyületet - ahol R egy R”CO- átltalános képletű acilcsoportot és ebben R” 1—5 szénatomos, egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoportot képvisel — hidrolizálunk, vagy b) valamely (X) általános képletű vegyületet — ahol R’ védőcsoportot, mégpedig adott esetben egy vagy két rövidszénláncú alkoxicsoporttal, célszerűen metoxicsoporttal, vagy rövidszénláncú alkilcsoporttal, célszerűen metilcsoporttal helyettesített benzilcsoportot képvisel — védőcsoportjait eltávolítjuk, vagy c) valamely (VIII) általános képletű vegyületből — ahol R és R’ a fenti jelen tésűek — az R acilcsoportot és az R’ védőcsoportokat eltávolítjuk, és kívánt esetben az a)—c) eljárások bármelyikével kapott (I) képletű 9-(l,3-dihidroxi-2-propoxi-metil)-guanint gyógyászati szempontból elfogadható sóvá alakítjuk, vagy az (I) képletű vegyület sójából a bázist felszabadítjuk, vagy az (I) képletű vegyület valamely sóját valamely más, gyógyászati szempontból elfogadható sóvá alakítjuk. 2. Eljárás vírusellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. Igénypont szerinti eljárással kapott (I) képletű 9-(l 3 -dihi droxl -2 -propoxi -me til Eguanin t vagy gyógyászati szempontból elfogadható sóját a gyógyszerkészítésnél szokásos vivőanyagokkal és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 2 db rajz 7
