186502. lajstromszámú szabadalom • Eljárás elmeszesedéssel szemben ellenálló beültethető szövet előállítására
1 2 A találmány beültetésre alkalmas természetes szövetek készítésével, pontosabban a rögzített szövet beültetést követő elmeszesedésének megakadályozását szolgáló kezelésével foglalkozik. Az állati szövetek több év óta széles körű felhasználást nyernek különböző pótló anyagokként emberekben. A leginkább említésre méltó ezek közül a sertés szívbillentyűk alkalmazása hibás emberi kéthegyű, háromcsúcsű és főütőeri szívbillentyűk pótlására. Szintén jelentős a fő ütőerek, vénák és emberi köldökzsinór alkalmazása főütőerek toldására és más csöves járatok pótlására emberekben. A sertés szívbillentyűket több év óta használják, általában jó eredménnyel. Az ilyen billentyűk elkészítése a beültetéshez ismeretes az irodalomban és szabadalmakban is, mint pl. a 3, 966 401 és 4, 050, 893 sz egyesült államokbeli szabadalmakban. Röviden ismertetve, a billentyűt kivágják a donor szívéből, körülvágják, tisztítják, és cserző folyadékba, mint pl. 0,2%os glutáraldehid oldatba mártva rögzítik. Néhány órás kezelés után a rögzített billentyűt a glutáraldehidből eltávolítják, leöblítik, befogják egy feszítőkeretbe és glutáraldehid oldatban tárolják felhasználásig. Egy probléma azonban mégis felléphet egyeseknél a sertés szívbillentyűkkel kapcsolatban, mégpedig a billentyű-lemezkék elmeszesedése hosszabb idő után, amely csökkenő rugalmasságot és a hatásosság végleges elvesztését eredményezi a billentyű működésében. A jelentősebb elmeszesedés könnyen észrevehető az érintett billentyű röntgenképében. Ennek megfelelően a jelen szabadalom tárgy egy olyan eljárás, amely megakadályozza a rögzített természetes szövet elmeszesedését a beültetés után. A jelen bejelentés tárgyát képezi továbbá a rögzített sertés szívbillentyű kezelése az elmeszesedés megakadályozására, amikor ez a sertés szívbillentyű emberi szívbillentyű helyettesítésére szolgál. Az itt hivatkozott rögzített vagy rögzített szövet kifejezések olyan szövetekre vonatkoznak, amelyeket cserzőoldattal, mint pl. 4%-os formaldehiddel vagy 0,2%-os glutáraldehiddei kezeltek megfelelő ideig, a beültetésre szánt természetes szövetek előkészítésére hagyományosan alkalmazott körülmények között. A cserzési eljárás nem képezi a jelen bejelentés részét. Természetes szöveteket, úgymint sertés szívbillentyűket vagy marha szívburok szöveteket, amelyeket a hagyományos módszerekkel rögzítettek a beültetéshez, a beültetés előtt vízoldható, 7—18 szénatomos szulfatált alifás alkoholok, pl. nátrium-dodecil-szulfát (SDS) oldatával kezeljük. A kezelést SDS 1%-os oldatában, szobahőmérsékleten végezzük 24 órán át. A kezelt szövetet az SDS oldatból eltávolítjuk, leöblítjük és tárolás céljából steril glutáraldehid oldatba helyezzük vissza, amíg beültetéshez fel nem használjuk. A jelen találmány szerint kezelt sertés szívbillentyű-csúcs szövetekkel kapcsolatban jellemzésül felhozzuk, hog^a szövet átlagban kevesebb, mint 1 mikrogramm Ca -t tartalmaz 1 mg nedves szövetben átültetés után 8 héttel. A legelőnyösebb kiviteli módokat a következőkben ismertetjük. A jelen találmány szerinti természetes szövetet azzal lehet jellemezni, hogy amikor élő állatba beültetjük, rendkívül kis mértékben meszesedik. A szövetek meszesedése általában akkor figyelhető meg, amikor rögzített szövetet izomszövetbe ültetjük be, vagy melegvérű állat véráramába helyezzük. Bár a jelen találmány szerinti szövetet elsősorban hibás emberi szívbillentyűk helyettesítésére kívánjuk használni, a szövet hajlamossága az elmeszesedésre megfelelően meghatározható állatokban történő vizsgálatokban. A természetes szövet kezelési módszere az elmeszesedési hajlam csökkentésére tehát a tárgya az 1981. április 30-án benyújtott 259,762 sorozatszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésünknek. A bejelentés módszere szerint a rögzített természetes szövetet egy vízoldható, szulfatált, 7—18 szénatomos alifás alkohol vizes oldatával kezeljük. Az alkil-rész lehet egyenes vagy elágazó láncú, előnyös alkilszulfátok a lauril-szulfát, mirisztil-szulfát, cetil-szulfát, sztearil-szulfát és oleil-szulfát. Két vagy több alkilszulfát keveréke is használható, ha szükséges. Az alkil-szulfátok sói legalább 2% (súly szerint) koncentrációban oldhatók vízben szobahőmérsékleten, és legfeljebb 5% koncentrációban. Megfelelő sók a C? lg alkil-szulfátok nátrium, kálium és ammónium-sói, valamint amin-sói, mint pl. a trietilamin-lauril-szulfát. A lauriI(dodecil)szuIfát nátriumsója a leginkább előnyös, ennek használatát mutatjuk be az ezt kővető részletes példákban. SDS kezelő oldatot (1%) készítünk 10 g SDS és 1,4 g N-2-hidroxi-etil-piperazin-N -2-etánszulfonsav (HEPES) feloldásával egy liter desztillált vízben, és az oldat pH-ját 7,4-re állítjuk be 1 n nátrium-hidroxid oldattal. 50 db rögzített, egyenként kb 20—30 mg súlyú sertés szívbillentyű-csúcs szövetet sóoldatban átöblítünk a glutáraldehid eltávolítása céljából^ majd 50 ml SDS kezelő-oldatba helyezzük 20—25 dC hőmérsékleten. A szövetdarabkákat tartalmazó oldatot mágneses keverővei folyamatosan keverjük. A kezelő-oldatot nyolc óránként cseréljük, és a kezelést 24 órán át folytatjuk. Az SDS kezelés után a beültetésre való előkészítéshez a szövetdarabokat 0,2% glutáraldehiddei átöblítjük, újraszterilezés céljából 24 órára 1% glutáraldehidet tartalmazó 20%-os izopropil-alkohol oldatba merítjük, majd ismét steril, 0,2%-os glutáraldehid-oldatba helyezzük vissza a beültetésig. Az SDS kezelés hatásosságát a rögzített szövet elmeszesedésének visszaszorításában állati beültetési kísérletekkel határozzuk meg a következőkben ismertetett eljárás szerint. 180-200 g súlyú hím Sprague-Dawley patkányokat érzéstelenítünk és steril körülmények között hasi sebészeti kezelésre előkészítünk. A hasi területet leborotváljuk, fertőtlenítjük, és hosszanti, kb 4 cm hosszú középvonali bőrmetszést végzünk a hasi felületen. A bőrt elválasztjuk az alatta fekvő izomtól, és három kis üreget alakítunk ki az izomban a középvonali metszés mindkét oldalán olyan módon, hogy kis bemetszést, majd tompa kivágást végzünk a hasfal izomba. Egy-egy darab SDS-sel kezelt szövetdarabot, miután steril sóoldatba helyeztük a glutáraldehid eltávolítása céljából, belhelyezünk egy-egy izom-üregbe. A bőr-bemetszést lezárjuk és az állatot visszahelyezzük a ketrecébe, 60 db SDS-sel kezelt szövetet ültetünk be 10 patkányba. A kontroll csoport is 10 patkányból áll, amelyekbe azonos körülmények között szintén 60 darab rögzített sertés szívbillentyű-csúcs szövetet ültetünk be, amelyeket azonban nem vetettünk alá SDS kezelésnek. 186.502 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
