186375. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-származékok előállítására
13 186375 14 (3 millimol) Boc-DL-(p-F)Phe-OH 8,0 ml dimetil-formamiddal készült oldatát, ezután 0,81 g (6 millimol) 1-hidroxi-benzo-triazolt, és végül 0,62 g (3 millimol) diciklohexil-karbodiimid 4 ml dimetil-formamiddal készült oldatát. A reakcióelegyet kalcium-szulfáttal töltött csővel védjük a nedvességtől, és másfél órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A sárga színű maradékot 300 ml etil-acetátban és 200 ml vízben oldjuk, a vizes részt leválasztjuk, íz etil-acetátos részt háromszor 300 ml 10-es pH-jú pufft roldattal, utána háromszor 300 ml 0,1 n sósavval, és végül 300 ml vízzel mossuk. Ezután magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon 1,44 g (hozam: 100%) cím szerinti vegyületet kapunk. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint a termék diciklohexil-karbamidot :s tartalmaz. d) lépés DL-p-Fluor-fenil-alanil-L-p-metoxi-fenil-glicin-amid A c) lépésben leírt módon nyert termék 4 ml ecetsav - val készült oldatához hozzáadunk 1,0 ml anizolt, 1,0 m1 trietil-szilánt és 10 ml, 1,54 n, ecetsavas sósav-oldatot Az elegyet kalcium-szulfáttal töltött csővel védjük a nedvességtől, és fél órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána 600 ml dietil-éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, 2 x 25 ml dietil-éterrel mossuk és 35 °C hőmérsékleten, csökkentett nyomáson megszárítjuk. Ily módon 1,10 g (hozam: 96%) cím szerinti vegyületet kapunk. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint a termék tiszta. e) lépés L-Tirozíl-D-alanil-glicil-DL-p-fluor-fenil-alanil-L-p-metoxi-fenil-glicin-amid, trifluor-ecetsavas só 1,10 g (2,89 millimol), a d) lépésben leírt módon nyert termék 9 ml dimetil-formamiddal készült szuszpenziójához 0 °C hőmérsékleten hozzáadjuk 1,70 g (2,88 millimol) Boc-L-Tyr-D-Ala-GIy-OH, diciklohexil-aminsó 21 ml dimetil-formamiddal készült szuszpenzióját. Az ily módon kapott elegyhez keverés közben hozzáadunk 770 mg (5,76 millimol) 1-hidroxi-benzotriazolt, majd 594 mg (2,88 millimol) diciklohexil-karbodiímid 2,5 ml dimetil-formamiddal készült oldatát. Az elegyet 1,25 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána a diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A sárga színű maradékhoz hozzáadunk 6,0 ml anizolt, 6,0 ml trietil-szilánt és 60 ml trifluor-ecetsavat. Az oldatot kalcium-szulfáttal töltött csővel védjük a nedvességtől, és fél órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a sárga színű, olajos maradékhoz hozzáadunk 1,5 liter dietil-étert, és az ily módon kapott csapadékot kiszűrjük és csökkentett nyomáson megszárítjuk. Ily módon 2,01 g (hozam: 93%) nyers, cím szerinti vegyületet kapunk. f) lépés A végtermék előállítása kromatográfiás tisztítás útján Az e) lépésben leírt módon nyert terméket az 1. példa ej lépésében leírt módon kezelve választjuk szét a két diasztereomert, ily módon 763 mg cím szerinti vegyületet kapunk. [oOd = +67,06° (c=0,375, 1 n sósav és dimetil-formamid 3 : 1 arányú elegye). [«Lm = +263,88° (c=0,375, 1 n sósav és dimetil-formamid 3 : 1 arányú elegye). Analízis a C34H41FN609 (696,738) képlet alapján: számított: C: 58,61; H: 5,93; N: 12,06; F: 2,73; talált : C : 58,90 ; H : 6,03 ; N : 12,34 ; F : 2,53. Aminosav-analízis: Gly: 1,00; Alá: 1,00; Tyr: 0,99; Pgl(MeO) : 1,04; Phe(F): 0,89; NH3: 0,99; peptid% : 90. 3. példa L-Tirozil-D-alaníl-glicil-L-p-fluor-fenil-alanil-L-fenil-glicin-amid, ecetsavas só, és L-tirozil-D-alanil-glicil-L-p-fluor-fenil-alanil-D-fenil-glicin-amid, ecetsavas só E termékeket a 2. példában leírt módon állítjuk elő, jellemző adataik : 1. Az 5-helyen L-fenil-glicin-amidot tartalmazó származék (1,043 g): Md —+90,72° (c=0,5, 1 n HC1). [«Lm = + 333,33° (c=0,5, 1 n HC1). Analízis a C33H39FN6Og (666,712) képlet alapján: számított: C: 59,45; H: 5,90; N: 12,61 ; F: 2,85; talált : C : 59,25 ; H : 6,09 ; N : 12,43 ; F : 3,08. Aminosav-analízis : Gly : 1,01; Alá: 1,00; Tyr: 1,00; Pgl : 0,99 ;Phe(F): 0,98 ;NH3: 1,01; peptid% : 90. 2. Az 5-helyen D-Fenil-glicin-amidot tartalmazó származék (626 mg) : [«]” = +17,50° (c=0,5, 1 n HC1). [«Lm=+79.76° (c=0,5, 1 n HC1). Analízis a C33H39FN6Og-ra (666,712) képlet alapján: számított: C: 59,45; H: 5,90; N: 12,61; F: 2,85; talált: C: 59,46; H; 5,88; N: 12,35; F: 2,68. Aminosav-analízis: Gly : 0,99; Alá: 1,00; Tyr; 0,96; Pgl: 1,02; Phe(F): 1,00; NH3 1,05; peptid% : 88. 4. példa L-Tirozil-D-treonil-glioil-L-p-fluor-fenil-alanil-L-(Na-metil)-metionín-amid, ecetsavas só Mindenben az 1. példában leírt módon eljárva 216 mg cím szerinti vegyületet kapunk, jellemző adatai : 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
