186309. lajstromszámú szabadalom • Reagens thrombocyta-szám és fehérjevérsejt-szám meghatározására
5 186309 6 mológéppel meghatároztuk a két-két módszer közötti korrelációt és a kapcsolatokat leíró y=ax+b függvény standard (a, b) paramétereit. Thrombocyta-számlálásra a korreláció (r)=0,927, és a két módszer közötti lineáris függvénykapcsolat az y=l,05x—0,94 kapcsolattal írható le, y-nal a találmány szerinti thrombocyta-számláló-oldat, míg x-szel a THROMBOFIX® alkalmazásával nyert eredményt jelölve (2. ábra). Megállapítható, hogy a találmány szerinti reagensoldat alkalmazásával nyert thrombocytaszám kb. 5%kal magasabb ugyanabból a mintából, mint THROMBOFIX® használatakor. A meghatározás természetéből eredően felülmérésről nem lehet szó ; hanem az a magyarázat, hogy a találmány szerinti reagens-oldat festékkomponense lényegesen affinisabb a thrombocyta makromolekuláinak savanyú csoportjaihoz és így a kép kontrasztosabb, jobban érzékelhető, azaz oldatuk kiküszöböli a korábbi festékoldstokkal kapott szisztémás alámérést. Megjegyzendő, hogy a THROMBOFIX® a fáziskontraszt mikroszkóppal végzett technikához viszonyítva is hasonló alámérést eredményezett. Fehérvérsejt-számolásra módszerünk a Türk-oldatos számlálással r=0,959-es korrelációt mutat, az összefüggés az X=0,97x+0,23 lineáris függvénnyel írható le, mely jelzi, hogy a két eljárás között nincs szignifikáns különbség. A következő példák a találmány szerinti reagensoldatok összeállítását és használatát mutatják be: 1. példa Számláló oldat: 200 ml 0,9%-os desztillált vizes NaCl-oldatot 5 ml 35%-os formaldehiddel és 770 ml ioncserélt deszt. vízzel összemérünk. Alapos keverés után ebben 100 mg toluidin-kék festéket feloldunk és az oldatot G—4-es üvegszűrőn szűrjük. 25 ml aceton hozzáadása után az oldatnak tisztának, szemcsementesnek kell lennie. 2. példa Thrombocyta- és fehérvérsejt-szám meghatározása alvadásgátolt vénás vérből : A meghatározást leghelyesebb etiléndiamin-tetraecetsavval (a továbbiakban: EDTA-val) alvadásgátolt vérből végezni, mivel az EDTA jelenlétében a thrombocyták minimális összecsapódása sem észlelhető. A vér EDTA-val történő levételekor az EDTA koncentrációját 2 mg/ml-re kell beállítani, vizes dínátrium-EDTA törzsoldat műanyag csőbe való előzetes beszárításával Az alvadásgátlás történhet 3,3%-os desztillált vizes tri nátrium-citrát-oldattal is, 9 rész vér, 1 rész citrát-arányt biztosítva a vér műanyag fecskendőbe történő levételekor. Kivitelezés : 25 mikroliter alvadásgátolt vénás vérhez műanyag kémcsőbe 475 mikroliter számláló-oldatot mérünk és felkeverés után 15 percig szobahőn állni hagyjuk. A thrombocyta- és fehérvérsejt-számlálást ezt követően hat órán belül el kell végezni. Számlálás előtt az oldatot ismét felkeverjük és Bürker-kamrába cseppentjük, majd 5 nedves kamrában 10 percig ülepedni hagyjuk. a) Thrombocyta-számolás : A Bürker-kamra 10 téglalapjába leszámolt thrombocyták számának összege szorozva 2-vel, ha az alvadás EDTA-val történt, illetve 2,2-vel, ha citráttal. A throm- 10 bocyta-számot G/literben kapjuk meg. b) Fehérvérsejt-számolás: Négy, három vonallal határolt nagy négyzetben található fehérvérsejtek számát 18-cal osztjuk (vagy 0,055- del szorozzuk), ha az alvadásgátlás citráttal és 20-szal 15 (vagy 0,05-dal szorozzuk), ha EDTA-val történt. A fehérvérsejt-számot így G/l-ben kapjuk. 3. példa 20 A thrombocyta- és fehérvérsejt-szám meghatározása kapilláris vérből: Fertőtlenített ujjbegyen vagy sarkon ejtett szúrás után az első vércseppet letörölve műanyag hegyű pipettába 25 (típusa pl. Finnpipetta, Gilson vagy Eppendorf stb.) 25 [i.1 vért szívunk, ezt a vérmennyiséget 25 p.12 mg/ml-es EDTA-oldatot tartalmazó műanyag csőbe mérjük és az alvadásgátlóval jól összekeverjük. 450 fal számláló oldat hozzáadása és alapos összerázás után legalább 15 percig 30 szobahőmérsékleten állni hagyjuk az oldatot, majd ismételt felkeverés után Bürker-kamrába cseppentjük és nedves kamrában 10 percig ülepítjük. A thrombocyta- és fehérvérsejt-számolás az alvadásgátolt vérre leírtakkal azonos, thrombocyta-számolás- 35 nál a szorzófaktor 2, fehérvérsejt-számolásnál 20-szal kell osztani. 4. példa 40 Mindenben az 1. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy formaldehid helyett 80 g 25%os glutáraldehidet mérünk be. 45 Szabadalmi igénypontok 1. Thrombocyta-szám és fehérvérsejt-szám normál fénymikroszkopikus úton történő egyidejű meghatározására alkalmas reagens, azzal jellemezve, hogy 0,1— 50 5 súlyrész acetont, 0,05—2,0 súlyrész formaldehidet vagy glutáraldehidet, 0,001—0,1 súlyrész tiazin-színezéket, előnyösen toluidin-kéket, 0,1—2,0 súlyrész ásványi sót, előnyösen nátrium-kloridot és 10—1000 súlyrész vizet tartalmaz. 55 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 200 ml 0,9%-os nátrium-klorid-oldatot, 25 ml acetont, 5 ml 35%-os formaldehidet, 770 ml ioncserélt desztillált vizet és 100 mg toluidin-kék festéket elegyítünk. ábra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 87.2493.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen Felelős vezető: BenkŐ István vezérigazgató
