186292. lajstromszámú szabadalom • Kombinált kétfázisú tápközeg vérvizsgálati rendszerekhez
3 186292 4 A találmány tárgya kétfázisú (szilárd és folyékony részből álló) tápközeg vérben lévő baktériumok tenyésztésére és kimutatására. A találmány szerinti tápközeg célszerűen olyan diagnosztikai eszközben használható, amely vérvételhez és a vérben lévő baktériumok tenyész- 5 téséhez és kimutatásához egyaránt alkalmazható. A 213 960 sz. német demokratikus köztársaságbeli szabadalmi leírásból ismert egy új, kétfázisú vérvételi rendszer, amely a vér közvetlen vételére, valamint a vérben lévő baktériumok tenyésztésére egyaránt szolgál. 10 Ez a diagnosztikai eszköz (amelyet a 1031/80. sz. közzétett magyar szabadalmi bejelentés is ismertet) kanüllel kialakított, üvegköpenyű, vérvétel céljára szolgáló részből és az ehhez kapcsolódó vérkultúra részből áll. A vérkultúra-edény gázzáróan lezárható ampullaként 15 van kialakítva, amelyen gyűrűalakú beszűkülés van. A szűkebb gyűrű alatt az edény szilárd táptalajjal, a gyűrű felett folyékony táptalajjal van töltve. Vérvételkor a kanülön keresztül beáramló vér (amennyiben baktériumokat tartalmaz) a folyékony tápközeget és — 20 ezzel elegyedve — a szilárd táptalajt is inokulálja. A vérkultúra-edényt megfelelő hőmérsékleten inkubálva a táptalajba került baktériumok tenyészthetők; a baktériumok jelenlétét a tápközeg kinézésének megváltozása jelzi. Ilyenkor a tenyészedény a gyűrű mentén 25 könnyen és a sérülés veszélye nélkül — feszítőgyűrű révén — elszakítható, hogy mindkét táptalajt egymástól elkülönítve lehessen vizsgálni. A leírt diagnosztikai eszköz táptalajával szemben bizonyos követelményeket támasztanak. A tápközeg a te- 30 nyésztés ideje alatt kedvező feltételeket biztosítson a baktériumok fejlődéséhez. A szervezet védekező rendszerének a vérben lévő részei (korpuszkuláris és nemkorpuszkuláris) azonban nagymennyiségű baktériumot tudnak megölni, illetve inaktiválni. A fagocita sejt- 35 nyúlványai körbefolyják a kórokozót, vacuola keletkezik, és megfelelő enzimek segítségével a fagocita a mikrobát megemészti. A fenti okból a baktérium-tenyészetek segítségével végzett vérvizsgálat céljaira számos olyan adalékot ki- 40 sérleteztek ki, amelyek a védőrendszert, különösen a fagocitózist gátolják. Az ismert anyagok közül a polianetol-szulfonát vált be legjobban ; egyben a vér alvadását is gátolja. A vérben élő baktériumok tenyésztésére például^is- 45 mert (Heilberufe 1980/6) az alábbi összetételű tápközég ; triptán 20,0 g dextróz 2,0 g szacharóz 100,0 g 50 Na2HP04 2,5 g 5%-os Na-polianetol-szulfonát oldat 8,0 ml deszt. víz ad 1000,0 ml A svájci BECTON, DICKINSON cég prospektusai 55 szerint az aerób és anaerob mikroorganizmusok széles spektrumának növekedéséhez alkalmas táptalaj különböző pepton-féleségek mellett dextrózt, ásványi sókat, nátrium-aminoszulfátot és L-ciszteint tartalmaz. A Hofmann—La Roche cég peptont, nátrium-kloridot, diká- 60 lium-foszfátot, glükózt, szacharózt és ismeretlen összetételű fagocita-gátló adalékot tartalmazó tápközeget forgalmaz. A vérben lévő baktériumok tenyésztéséhez használt tápközegnek a vér alvadását is kell gátolnia. A véralva- 65 dás gátlására általában oxalátot, citrátot, heparint vagy nátrium-fluoridot alkalmaznak. Ezek az anyagok jelen esetben azonban nem alkalmasak, mert baktericid hatást fejtenek ki, így a baktériumok növekedését és ezzel a kimutatását is gátolják. A találmány célja olyan tápközeg kifejlesztése, amely a leggyakoribb baktériumok számára kedvező életkörülményeket biztosít, a véralvadást gátló és antibaktericid adalékokat tartalmaz és a tenyésztés alatt kialakult baktérium-telepeket a zárt vérvételi rendszerben láthatóvá teszi. A találmány feladata tehát az ismert és bevált tápközegek olyan módosítása, amelynek révén a tápközeg alvadásgátló és antibaktericid tulajdonságok javulnak, és a baktériumok kimutatása egyszerűbbé és megbízhatóbbá válik. Azt találtuk, hogy a fenti célkitűzés elérhető, ha alvadásgátló adalékként carrageenant alkalmazunk és ennek antibaktericid hatását indometacinnal felerősítjük. A találmány tárgya tehát kétfázisú (szilárd és folyékony részből álló) tápközeg vérben élő baktériumok tenyésztésére és kimutatására, mely tápközeg véralvadásgátló és antibaktericid adalékokat, valamint a szokásos szén-, nitrogén- és sóforrásokat tartalmazza. A találmány szerinti táptalajra jellemző, hogy folyékony része véralvadásgátló és antibaktericid adalékként carrageenan és indometacin kombinációját, szilárd része pedig brómkrezolbíbor indikátort tartalmaz. A találmány szerinti tápközeg egy előnyös kiviteli alakjára jellemző, hogy folyékony része a víz szacharóz pankreatinnal kialakított pepton glukóz hús kivonat nátrium-klorid indometacin carrageenan összetételnek, a szilárd része a steril agar glukóz brómkrezolbíbor összetételnek felel meg. 1000 g 90—110 g 18—22 g 8—12 g 2-3 g 2,5—3,5 g 0,0028—0,0035 g 0,01—0,08 g 99—100 g 0,45—0,55 g 0,0070—0,0090 g A carrageenan : nagymolekulájú, szulfatált poligalaktóz, amelynek véralvadásgátló tulajdonságai vannak. Ezen tulajdonságok mechanizmusa a Hagemann-féle tényező aktivitásának megváltozásával, valamint a trombociták aggregációjának gátlásával függ össze. A mintegy 10%-os szacharóz-tartalom a legtöbb kórokozó számára kedvező feltételeket, különösen megfelelő ozmotikus nyomást biztosít, és már sérült mikroorganizmusok túlélési kilátását is növeli. A szilárd tápközegben lévő brómkrezolbíbor indikátor a pH-érték eltolódására (semlegestől savasra) megváltoztatja a színét bíborról sárgára. Az indikátor egy része egyébként kioldódik a folyékony tápközegbe, úgy, hogy a pH megváltozása mindkét tápközeg esetén követhető. A tápközeg kiindulási pH-értéke mintegy 7,2. A mikroorganizmus élettevékenysége folytán, különösen szerves savak képződése, valamint a sejtlégzés során kiválasztott széndioxidnak a tápközegben való feloldódása a pH-érték a savas irányba eltolódik. A választott indi-3
