186278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás inaktivált chlamydia vakcina előállítására
5 186278 6 2. példa Az 1. példa szerint előállított Chlamydia szuszpenziót 1000 /Tg/ml etilén-iminnel inaktiváljuk szobahőmérsékleten 24 órán keresztül. Az inaktivált Chlamydiát tartalmazó folyadék 100 ml-jéhez 2%-os Al(OH)3-gélt, valamint 4 mg/ml szaponint adunk. A folyadékot 2 órán át állni hagyjuk, közben időnként összerázzuk. Az 1. példa szerinti vakcinához hasonló eítarthatóságú és hatékonyságú vakcinát kapunk. 3. példa Az 1. példa szerint előállított Chlamydia szuszpenziót 2000 /ig/ml végkoncentrációig /9-propiolaktonnal inaktiváljuk a 2. példa szerint. Az inaktivált Chlamydiát tartalmazó folyadék 100 ml-jéhez 100 ml 2%-os Al(OH)3- gélt adunk, amelyet milliliterenként 1 mg tolerinnel (sugárkezeléssel detoxiűkált E. coliból nyert endoxin) egészítettük ki. A folyadékot 2 órán át állni hagyjuk, közben időnként összerázzuk. A kapott vakcinát 4— 8 °C-on tároljuk. Lejárati ideje ilyen tárolás mellett 1 év. A példák szerint előállított vakcinával juhokat és szarvasmarhákat a „vírusos” elvetélés ellen immunizálunk oly módon, hogy a vakcinát intramuszkulárisan applikáljuk juh esetében 1 ml/állat, szarvasmarha esetben 2 ml/állat mennyiségben. A kezelést egy hónapon belül kétszer végezzük (Booster-hatás). A kezelt állat legalább egy évig védett. Hatástani kísérletek Chlamydia fertőzéstől és vetéléstől mentes gazdaságból származó, valamint általuk komplementumkötési próbával ellenőrzött és negatívnak talált 80 juhot oltottunk az 1. példa szerinti vakcina 1 ml-ével subeutan, ugyanebből a gazdaságból származó 20 állatot kezeletlen kontrollnak hagytunk. A vakcinázott juhok közül 40-et 2 hét múlva (1. csoport), a másik 40-et pedig 4 hét múlva (II. csoport) oltottuk másodszor. A két oltás között történt az állatok megtermékenyítése. Az oltás után két és fél hónappal és az ellés várható időpontja előtt 6—8 héttel a kétféleképpen vakcinázott juhokat a kontroll állatokkal együtt virulens kórokozóval fertőztük. A fertőzést 1000 EIDjo (0,2 ml) bőr alá és 2 000 000 EID50 (0,2 ml) szájon át történő beadásával végeztük. Fertőzés után a kórokozókat a vetélt és a leellett állatokból a magzat, a magzatvíz és 24 órán belül vett hüvelyváladék mikroszkópos vizsgálatával, valamint hasított tyúktojás oltásával igyekeztünk kimutatni. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze. 5 Táblázat Csoport Juhok száma Fertőzés után védett elvetélt i 40 32 (80%) 8 (20%) ii 40 40 (100%) 0(-) kontroll 20 10 (50%) 10 (50%) 15 A táblázatból látható, hogy két vakcinálás, a másodikat az első után 4 héttel elvégezve, tökéletes védelmet nyújt a Chlamydia okozta abortusz ellen. Ugyanabból a szikanyagból a hagyományos módon (formalines inaktiválás, kicsapás timsóval, hordozó- 20 anyagként parafhnolaj), illetve a találmány szerinti eljárással (ez esetben inaktiválás etilén-iminnel, adjuválás olajemulziós vivőanyaggal) készítettünk modellvakcinákat. A vakcinák antigén-tartalma azonos volt. A hagyományos és az újfajta vakcinával 21-21 db növendék 25 juhot oltottunk. Az oltást követő 3. héten vett vérsavók ellenanyag titerét mikrokvantitatív komplementkötési próbával határoztuk meg. Míg a hagyományos vakcina esetén a komplementkötési próbával kapott átlagtiter 1 : 11,6 volt, az új vakcina 1 : 17,7 átlagtitert eredménye- 30 zett. A 42 állat alapvérének az átlagtitere 1: 6,4 volt. Szabadalmi igénypontok 35 1. Eljárás inaktivált Chlamydia-vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy 6—9 napig, előnyösen 7 napig előkeltetett tyúktojásokat a Chlamydia psittaci OKI 00 253 szám alatt letétbe helyezett törzzsel beoltunk, a tojásokat inkubáljuk, a 8. és 12. nap között elpusztult 40 embriót tartalmazó tojások szikhártyáját összegyűjtjük, homogenizáljuk, a szuszpenzió pH-értékét 5,8 és 7,8 közötti, előnyösen 7,2 értékre állítjuk be, a mikroorganizmust inaktiváljuk és a nyert folyadékot depót hatású anyaggal összekeverjük. 45 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási mód ja, azzal jellemezve, hogy a Chlamydia-szuszpenziót formaiinnal, /?-propiolaktonnai vagy etilén-iminnel inaktiváljuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosí- 50 tási módja, azzal jellemezve, hogy depót hatású anyagként ásványi olajat vagy Al(OH)3-gélt alkalmazunk. A kiadásért felel : a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 87.2490.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
