186117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil S-adaenozil-metionin származékok előállítására
186117 A (II) általános képletű észterek szilárd állapotban 45 °C-on korlátlan ideig stabilak. Mint már említettük, az új (I) általános képletű vegyületek további nagy előnye, hogy át tudnak jutni a sejteket körülvevő védőgáton. A 3. táblázatban a fenti tulajdonságra jellemző értéket adjuk meg. Az első tesztben a vegyületeket in situ vizsgáljuk. Éterrel altatott patkány belébe 1 ml fiziológiás sóoldatban oldott 2 mg vizsgálandó anyagot helyezünk. Az állatokat két óra elteltével leöljük és a béltartalmat (bélfal + tartalom) meghatározzuk. A második tesztben kifordított bélszakaszokat használunk, melyeket Krebs-Ringer szerint 37 °C- on inkubálunk, 10“4 mól/1 külső vegyületkoncentrációval szemben. Az összes vegyületet kénsavval savaddiciós sóvá alakítjuk, a sókban n értéke 2 vagy 3. 3. táblázat Vizsgált vegyül« R Rí Rz Vegyül« felszívódása bélben kiforditott bélben (dózis (nmól/óra/mg %-a) szövet) H H H 5 0,009 —CHj H H 59 0,078 —C2H5 H H 55 0,061-C3H7 H H 61 0,045-C4H9 H H 65 0,037-CjHn H H 68 0,025-CíHij H H 67 0,023 H —COCHj H 10 0,046 H-COC4H9 H 18 0,028 H-COCíHj H 12 0,017 H p-toluol-szulfonil-H 13 0,021 H szukcinil-H 25 0,016 H glutaril-H 23 0,018 H óktoil-H 62 0,023 H dodekanoil-H 65 0,019 H-COCH3-COCH3 65 0,047 H-COC4H9 —COC4H9 87 0,031 H szukcinil—COCH3 91 0,035 Az (I) általános képletű vegyületeket az alábbi eljárások szerint állítjuk elő. A) (II) általános képletű SAM-észterek előállítása A (II) általános képletű új SAM-észtereket bármely ismert módon előállított SAM-sóból is előállíthatjuk. Előnyösen szulfátsót használunk. Az SAM észterezésre használni kívánt vízmentes alkoholhoz 1—3% — előnyösen 2% — tömény kénsavat adunk. A fenti oldathoz keverés közben annyi SAM-szulfátot adunk, hogy a végkoncentráció az SAM-ionra nézve 10—100 g/1 — előnyösen 50 g/1 — legyen. Kis molekulasúlyú alkoholokkal tiszta oldatot, míg nagy molekulasúlyú alkoholok használata esetén szuszpenziót kapunk. A reakcióelegyet — a használt alkoholtól függően — 10—20 órán keresztül visszafolyatós hűtő alatt forraljuk. A reakció befejeztével minden esetben tiszta oldatot kapunk. A képződő SAM-észter mellett a reakcióelegy kis mennyiségű — legfeljebb 5% — SAM-t és az SAM-hőbomlásábó! -/armazó termékeket tartalmaz, a bomlástermékek mennyisége is az alkalmazott alkoholtól függ. A képződő észter és a bomlástermékek aránya a metil-észter esetében talált 80% észter és 20% bomlástermék aránytól az 5—6 szénatomos alkoholok esetén kapott 50% észter és 50% bomlástermék arányig változik. A reakcióelegyet lehűtjük, majd azonos térfogatú vizet adunk hozzá, vagy vízzel nem elegyedő alkohol esetén vízzel extraháljuk. A kénsav feleslegét úgy távolítjuk el, hogy hidroxilion-ciklusban lévő bázikus gyanta (AMBERLITE IRA 401 vagy AMBERLITE IRA 93) hozzáadásával a pH-t 3-ra állítjuk. B) (III) általános képletű SAM-savszármazékok előállítása Kiindulási anyagként ebben az esetben is bármely oldékony SAM-sót használhatunk, előnyösen szulfátsóból indulunk ki. Az SAM-sóból 50—200 g/1, előnyösen 100 g/1 koncentrációjú vizes oldatot készítünk. Az oldatot 1 °C-ra hűtjük és a hőmérsékletet állandó hűtéssel ezen az értéken tartva a pH-t 2 n nátrium-hidroxid-oldattal 7-re állítjuk. A kívánt terméktől függően az alábbi módon járunk el: a) 2—6 szénatomos alifás savak vagy aromás savak monoacilszármazékainak előállítása. Az acilezőszert (a kívánt sav anhidridjét vagy kloridját) kis részletekben, az SAM-hoz viszonyítva 1:1,2 mólarányban adagoljuk, miközben az oldat hőmérsékletét 1 °C-on és pH-ját 2 n nátrium-hidroxid adagolásával 7 értéken tartjuk. A reakció befejeztével — vagyis, amikor a pH értéke állandósul — a hőmérsékletet 20 °C-ra hagyjuk emelkedni. Az oldatot 20 g/1 koncentrációjúra hígítjuk és az esetleges csapadékot leszűrjük. Az SAM monoacilszármazékká alakulása nagyobb 90%-nál. A kapott oldatot ioncserélő gyantán kromatografáljuk. b) 7—12 szénatomos alifás savak monoacilszármazékainak előállítása. A kívánt savkloridot az SAM-hoz viszonyítva 1:3 mólarányban vízmentes oldószerben — például acetonban, dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban vagy hasonló oldószerben — oldjuk, - az oldat koncentrációja 10%, majd a kapott oldatot kis részletekben, a hőmérsékletet 1 °C-on és a ph-t 2 n nátrium-hidroxiddal 7 értéken tartva adagoljuk az SM-só oldatához. A reakció befejeződése után az oldat hőmérsékletét 20 °C-ra hagyjuk emelkedni. Az oldatot 20 g/1 koncentrációra hígítjuk, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a csapadékot szűrjük. A monoacilszármazékká alakulás foka ebben az esetben közel 80%. A kapott oldatot ioncserélő gyantán kromatografáljuk. c) 2—6 szénatomos alifás és vegyes savak triacilszármazékainak előállítása. Az acilezőszert az SAM-hoz viszonyítva 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
