186108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil S-adenozil-metionin sók előállítására
;36 108 2 Az összes esetekben az oldat pH-ja 6 és 7 közé van beállítva, előnyösen 6,5. A kromatográfiás tisztítás lépése (b) előnyösen Amberlite IR50 vagy Amberlite CG50 alkalmazásával végezhető. A c) lépés eluálását előnyösen a megfelelő sav 0,1 1 n vizes oldatával végezzük. Ha az eluátum titrálása (d-lépés) azt mutatja, hogy a jelenlevő sav ekvivalens mennyisége kisebb a szükségesnél (4, 5 vagy 6-nál), ahogy ez lenni szokott, akkor a hiányzó mennyiségnek pontosan megfelelő savmennyiséget kereskedelmi minőségű koncentrált vizes oldat formájában adjuk hozzá. Ha azonban kiderül, hogy fölös mennyiségű sav van jelen, ez kiküszöbölhető, ha az oldatot erősen bázisos, OH- formájú ioncserélő gyantával kezeljük, például Amberlite IRA-401-el. Az (e) lépésben az eluátumot optimális értékre bekoncentráljuk az utána következő liofilizálási eljáráshoz, vagyis egy 50—100 g/1 közötti értékre, előnyösen 70 g/l-re. A végső liofilizálási a szokásos módszerekkel végezve 100%-os tisztaságú, teljesen kristályos sót kapunk. Ha a liofilizálási egy megfelelő inert anyag jelenlétében végezzük, kevesebb visszamaradó nedvességet tartalmazó, ezért stabilabb terméket kapunk. Még pontosabban azt találtuk, hogy ha a készített sót injektálható gyógyszer formájában való felhasználásra szánjuk, a liofilizálást mannit jelenlétében kell végezni. Ha azonban a kapott sót orális tabletták készítésére használjuk, a liofilizálást porított kovasav jelenlétében kell elvégezni. A következőkben néhány gyakorlati példát közlünk csupán szemléltetésül annak érdekében, hogy az új termékeket könnyebben lehessen elkészíteni. 1. példa 110 1 etil-acetátot és 110 1 vizet adunk szobahőmérsékleten SAM-mal dúsított (6,88 g/kg) 900 kg élesztőhöz, Schlenk szerint (Enzymológia, 29, 283 (1965)). 30 percnyi élénk keverés után 5001 0,35 n kénsavat adunk hozzá, és a keverést további másfél órán keresztül folytatjuk. Az elegyet szűrjük és a maradékot vízzel mosva 4,40 g/1 SAM-ot tartalmazó 1400 1 oldat keletkezik, ami megfelel a kiindulóanyagban jelenlevő anyag 99,5%-ának. Az oldathoz keverés közben 23 g pikrolonsavat adunk 250 1 metil-etil-ketonban. Éjszakán át állni hagyva a csapadékot centrifugálással elválasztjuk és vízzel mossuk. A csapadékot szobahőmérsékleten, keverés közben feloldjuk 62 liter 1 n metanolos kénsavoldatban. Az oldhatatlan rész kiszűrése után az oldathoz 500 liter acetont adunk. Ha a csapadék teljesen leülepedett, a felülúszó oldatot dekantáljuk és az oldhatatlan maradékot kevés acetonnal mossuk. A csapadékot feloldjuk 800 1 desztillált vízben, hozzáadunk 2 kg derítőszenet és az elegyet szűrjük. Előkészítünk egy oszlopot 200 liter Amberlite IRC 50 + gyantával és óvatosan mossuk desztillált vízzel. Az előzőekben kapott vizes oldathoz 4,8 kg jégecetet adunk keverés közben, majd 2 n NaOH-t amíg 6,5-es pH-t kapunk. Az oldatot 400 l/óra sebességgel engedjük át a gyantaoszlopon és ezt a sebességet tartjuk az egész folyamat alatt. Ezután 200 1 desztillált vizet, 1600 1 0,1 mól/l-es savat és további 200 1 desztillált vizet engedünk át egymás után. A SAM-t 400 1 0,1 n kénsavval eluáljuk. A kapott eluátum kb. 4 kg SAM-et tartalmaz és vákuumban 60 literre pároljuk be. Hozzáadunk 0,5 kg csontszenet, majd megszűrjük az elegyet. Az oldatot megtitráljuk. Koncentrált kénsavat adunk az oldathoz, amíg 2,5:1 H2SO4/SAM mólarányt kapunk, majd liofilizáljuk az oldatot. 6,5 kg terméket kapunk, amelynek összetétele a következő: SAM* 61%; H2SO4 37,5%; H2O 1,5%. A só kristályos halmazállapotú és több, mint 20%-ban oldódik vízben színtelen oldat képződése közben, de a közönséges szerves oldószerekben oldhatatlan. Az Anal. Biochem. 4, 16—28 (1971) szerint végzett vékonyrétegkromatográfia azt mutatja, hogy a termék szennyeződésektől mentes. Az 1. táblázat tartalmazza az analitikai adatokat, amelyek megfelelnek a következő képletű vegyületnek: CI5H22N605S - 2,5H:S04 ■ 0,5H2O 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 1. táblázat Só összegképlet N (%) számított talált számított S(%) talált S-adenozil-metionin (%) számított talált E 1%, (256nm) (6nH2 SO4) SA.M-2H2SO4O.4H2 C15H26N6O13S3"0,4 H2O 13,98 14,00 15,97 16,01 66,2 66,3 242 SAM 2,5 H2SO4 0,5 H2O Ci5H27NéOisS3.5-0,5 H2ö 12,88 -12,66 17,18 17,15 61,0 60,9 223 SAM -3H2SO4 0,7 H2O Ci5H2sN<,OnS4-0,7 H20 11,91 11,89 18,16 18,05 56,5 56,4 207 SAM-4HC1-0.4 H2O Ci5H26NéOjSCl4'0,4 H2O 15,25 15,55 5,81 5,93 72,2 72,4 264 SAM ■ 5HC1 "0,5 H2O Ci5H27N6OsSCl5-0,5 H2O 14,26 14,25 5,43 5,44 67,6 67,6 247 SAM '6HCl '0,7 H2O Ci5H28N605SCVü,7 H2O 13,33 13,15 5,08 5,03 63,2 63,1 231 SAM 4H3PO4 0,4 H2O C15H34N6O2 ] SP4'0,4 H2O 10,53 10,54 4.01 4,03 50,7 49,9 176 SAM ■ 5H3PO4 0,5 H2O C|5H37N<,O25SP5-0,5 H2O 9,35 9,33 3,56 3,55 44,4 44,4 156 SAM • 6H3PO4'0,7 H2O Cl5H40N6O29SP6 0,7 H2O 8,4 8,38 3,2 3,2 39,9 39,9 140 3
