186014. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szarvasmarhák parainfluenza-3 virus okozta megbetegedése elleni inaktivált, adjuvált oltóanyag előállítására
\ 186014 zott agglutinátum stabilnak mutatkozott, más esetekben gyorsan eluálódott. A PI-3 vírusok másik felületi antigénje, a neuramidáz felelős az agglutináció folyamatával ellentétes irányú elucióért. A vakcina jó és specifikus immunizáló hatásának elérésében tehát jelentős szerepe van a kiválasztott törzsek tulajdonságainak. A vakcina készítéséhez használt törzseket úgy kell összeválogatni, hogy legalább egynek nagy legyen az infektív titere, legalább egynek legyen magas a hemagglutinációs titere, legalább egynek legyen magas a neuramidáz-aktivitása, továbbá az agglutinátumban is mutatkozzék különbség a feloldódásban, a hemolizisben. A vírusok ilyen kombinálása olyan sokoldalú vakcinát eredményezne, amely minden PI-3 vírussal szemben hatékony. A fenti megfontolások alapján az R/GY 4/5 jelű parainfluenza-3 vírustörzsek (OKI 00 212) és az R/ME 9/7 jelű parainfluenza-3 vírustörzset (OKI 00213) választottuk ki. Az R/GY 4/5 jelű törzs a PI-3 Umea jelű referens törzsével rokon, felnőtt állatok ún. járványos köhögése során izoláltuk hazai állományból. A törzs biológiai tulajdonságaira jellemző a magas infektív titer, erős hemagglutinációs aktivitás, amelyet magas he- 5 magglutinációs titer mellett finom agglutinátum, gyors elució és azt követő hemolízis jellemez. Az R/ME 9/7 jelű törzs ugyancsak hazai állományból származik. E vírust 3—5 hónapos borjak heveny legzőszervi megbetegedése során izoláltuk. Jellemző 10 rá a magas infektív titer, erős hemagglutinációs aktivitás, amelyet kifejezetten rögös, durva csapadékot eredményez; az elució igen lassú, és hemolízis nem észlelhető. A vírusok kiválasztására a vonatkozó felismeré- 15 sünkhöz az is tartozik, hogy az egyes esetekben társfertőzésként szerepet játszó RS vírussal kombinálható a PI-3 vakcina. (A világirodalomban ilyen oltóanyagra vonatkozóan nincs adat.) Az inaktiválási eljárás legkíméletesebb változatát 20 kutatva többféle inaktiváló ágenssel végeztünk kísérleteket, eredményeiket az 1. táblázat mutatja. 1. Táblázat Időtartam Hőfok °c Infektív titer Hernaglutináció (vörösvértestek) Kezelés szarvasmarha tengerimalac kezeletlen 7,0 64 512 UV 20 perc — 8 16 Freon 60 perc — 64 128 Na-dodecilszulfát 60 perc 3,0 32 64 0,2% Na-dodecilszulfát 120 perc 3,0 16 64 0,2% magnézhanklorid 10 perc 50 2,0 64 256 I mólos magnéziumklorid 20 perc 50 — — — 1 mólos tripszin 0,25% 30 perc 2,0 — — tripszin 0,25% 60 perc 1,0 — — tripszin 0,5% 30 perc — — — hőkezelés 80 perc 50 5,5 — — hőkezelés 100 perc 50 2,0 — — hőkezelés 120 perc 50 — — — formaldehid 400 ug/ml 20 óra — 32 128 /5-propiolakton 20 óra — 32 128 1000 ug/ml etilénimin 250 ug/ml 20 óra — 64 512 A táblázatból kitűnik, hogy míg a vírusvakcinák inaktiválására hagyományosan használt szerek (például formaldehid, /1-propiolakton) a vírus felületi antigénjeit károsították, addig az etilénimines kezelés a vírus hemagglutinációs tulajdonságát, felületi antigénjeinek aktivitását egyáltalán nem befolyásolta. Ezeket az eredményeket in vivo kísérletek is alátámasztották. A különböző módon inaktivált és adjuvált kísérleti vakcinákkal nyulakat oltottunk (5 nyúl/vakcina). A nyulak vérében a 0., 14. 28. napon vizsgáltuk az ellenanyag titereket mind a vírussemlegesítési (VN), mind a hemagglutinációgátlási (HÁG) próbában. Az átlagolt eredményeket a 2. táblázat szemlélteti. 2. Táblázat Oltóanyag (inaktiválószer, adjuváns) 0. nap VN Ellenyanyag 14. nap VN VN 28. nap HÁG Nem inaktivált + olaj _ _ 128 64 etilénimin + alugél — — 32 64 etilénimin + olaj — — 128 256 /J-propiolakton + olaj — — 64 24 Freon X olaj — — 32 64 UV + olaj — — 128 48 120 perc 50 °C + oIaj — — — — tripszin + olaj — — — — Formalin + olaj — — 64 24 3
