186007. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonadotrop hormon antagonista peptidek előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás új dexapeptidek előállítására, amelyek emlősöknél — beleértve az embert - gátolják a hipofízis (agyalapi mirigy) gonadotropin-termelését, és az ovuláció (érett tüsző felrepedése és a petesejt kiszabadulása) gátlására és/vagy szteroid hormonok leadásának visszaszorítására alkalmasak. Közelebbről meghatározva a találmány szerint olyan peptideket állítunk elő, amelyek gátolják az ivarmirigyek működését és szteorid hormonok, mint progeszteron és tesztoszteron termelését. A hipofízis nyélen keresztül kötődik a hipotalamuszként ismert agyalapi részhez. A hipofízis termeli egyebek mellett a follikulust (tüszőt) stimuláló hormont (FSH) és a luteinizáló hormont (LH), melyeket gonadotropinoknak vagy gonadotrop hormonoknak is nevezünk. E hormonok együttesen szabályozzák az ivarmirigyek funkcióját, amikor azok a herében tesztoszteront és a petefészekben progeszteront és ösztrogént termelnek, és szabályozzák a csírasejtek (gaméták) termelését és érését is. Az agyalapi mirigy elülső lebenyének hormontermeléséhez általában a hipotalamuszban képződő más hormonesoport előzetes felszabadulása szükséges. A hipotalamuszhormonok egyike gonadotrop hormonok, főleg az LH felszabadulását megindító faktorként („releasing factor ) hat, az LH számára felszabadító faktorként ható hipotalamusz-hormont e leírásban GnRH-nak nevezzük, bár az LH-RH és az LRF megjelölés is használatos. A GnRH-t a következő szerkezetű dekapeptidként izolálták és jellemezték: p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. A peptidek két vagy több aminosavat tartalmazó vegyületek, melyekben az egyik aminosav karboxilcsoportja a másik aminosav aminocsoportjához kapcsolódik. A GnRH fenti képlete összhangban áll a peptidek szokásos jelölésével, ahol az aminocsoport a bal oldalon és a karboxilcsoport a jobb oldalon helyezkedik el - Az aminosavmaradék helyzetének azonosítása céljából az aminosavmaradékot balról jobbra menve számozzák. A GnRH esetében a glicin karboxilcsoportjának hidroxilrészét aminocsoport (NH2) helyettesíti. A fenti aminosavmaradékok rövidítései szokványosak és az aminosavak triviális nevén alapulnak, így p-Glu = hiszti din HIS = hisztidin Trp = triptofán Ser = szerin Tyr = tirozin Gly = glicin Leu - leucin Arg = arginin Pro = prolin Phe = fenil -alanín és Alá =alanin. Ezeket az aminosavakat á valinnal, izoleucinnal, treoninnal, lizinnel, aszparaginsawal, aszparaginnal, glutaminnal, ciszteinnel, metioninnal, fenil-alaninnal és prolinnal együtt általában szokványos, természetes előfordulású aminosavaknak tartják, A glicin kivételével a találmány szerinti peptidek aminosavai L-konfigurációjúak, ha erre nézve külön utalás nincs. Ismeretes, hogy ha a GnRH dekapeptid 6-helyzetében a Gly-t D-aminosavak helyettesítik, a kapott pepiid emlősöknél mintegy 1-35-ször hatásosabban serkenti az LH és egyéb gonadotropinok hipofízis általi leadását, mint a GnRH. K. U. Prased és munkatársai szerint (J. Med. Chem. 19,492 (1976)) a nagyobb hatékonyság úgy is elérhető, hogy a 3-helyzetben 3- •/1-naftil-Ala szubsztituenst alkalmaznak. E felszabadító hatás létrejön, ha emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, orálisan, intranazáltsan vagy intravaginálisan alkalmazzák a GnRH-ana lógot. Az is ismeretes, hogy a GnRH dekapeptid 2- helyzetében a Hís különböző aminosavakkal való helyettesítése (vagy a His elhagyása) olyan analógokat eredményez,, amelyek emlősöknél gátolják az LH és más gonadotropinok hipofízis általi leadását. Egyes nőstény emlősök, melyeknek nincs ovulá:iós ciklusuk és nem rendelkeznek hipofízis- vagy petefészek-rendellenességgel, normális mennyiségű LH és FSH gonadotropint kezdenek szekretálni GnRH megfelelő alkalmazása után. így a GnRH alkalmasnak látszik terméketlenség kezelésére olyan esetekben, ahol a lüpotalamuszban működésbeli liiba áll fenn. Bizonyos okokból az ovuláció meggátlása kívánatos nőstény emlősöknél, és a GnRH normális működését antagonizáló GnRH-analógokat alkalmazzák az ovuláció megakadályozása céljából. Emiatt kiterjedten vizsgálják a GnRH-antagonista GnRH-analógoknak fogamzásgátlásra vagy a fogainzási periódusok szabályozására való esetleges alkalmazását. Olyan peptidek létrehozása kívánatos, amelyek hatásos antagonistái az endogén GnRH-nak és megakadályozzák az LH szekrécióját és az emlősök ivar mirigyeinek szteorid-termelését. A találmány céljául annak a feladatnak a megoldását tűztük ki, hogy emlősöknél — beleértve az embert — gonadotropin-felszabadulást gátló peptideket állítsunk elő, melyek alkalmasak hím és nőstény emlősök ivarmirigyei szteorid-termelésének gátlására. A tökéletesített GnRH-analógok GnRH-antagonisták és emlősöknél gátolják a szaporodási folyamatot. Ezen analógok a gonadotropinok és szexuálhormonok képződésének gátlására használhatók különböző körülmények között, beleértve a korai nemi érést, hormondependens rosszindulatú daganatokat, menstruációs zavarokat és endometriózist (a méhnyálkahártya szabálytalan elhelyezkedésével járó állapotot). Általában a találmány szerint olyan dekapepüdeket szintetizálunk, amelyek emlősöknél - beleértve az embert - erősen gátolják a gonadotropinok hipofízis - szekrécióját, és/vagy gátolják az ivarmirigyek szteorid-leadását. E peptidek olyan GnRH-analógok, melyek 1-helyzetű dehidro-prolin formájában 3- és/ vagy 6-helyzetben B-(naftil)-D-alanint (a következőkben: B-D-NAL) tartalmaznak, és előnyösen a 2-helyzetben is szubsztituens van jelen. Az 1-helyzetű szubsztituens módosítható úgy, hogy a a-amino-csoportja acilcsoportot, például formil-, acetilvagy akrilil cső portot tartalmaz. Az. 1-helyzetben előnyös a dehidro-L-Pro alkalmazása. A 2-helyzetben fluoratommal szubsztituált D-Phe található, ami a benzolgyűrű specifikus módosítása következtében fokozott antagonists aktivitást eredményez. A fenilgyűrű előnyösen a 4-helyzetben tartalmazza a fluoratomot. A 3-helyzetben előnyös a B-D-NAL aminosav, de D-Trp is használható. A 6-helyzetben ugyancsak B-D-NAL vagy D-Trp foglal helyet. 186 007 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
