185981. lajstromszámú szabadalom • Reagenscsíkok analitikai célokra
1 185 981 3. példa Reagenscsík szérum húgysavtartalmának meghatározására Alkalmas üvegedénybe töltött, szobahőmérsékleten 1 évig stabilis, 7,0 pH-jú, 0,5% detergenst és 1 mmól/1 mennyiségű N-etil-N-(2-hidroxi-etil)-m-toluidint (EHT) tartalmazó 0,1 mólos káliumfoszfát oldat 80 ml-ébe kb. 120 mm hosszú és 10 mm széles olyan reagenscsíkot helyezünk, amely 3 területén, egyenként két-két egymás felett elhelyezett, 10x15 mm felületű reagenshordozót tartalmaz az előző példákban leírt módon hálóval rögzített alakban. A reagenscsík alsó részén elhelyezkedő két terület reagenshordozóként 2,5 mg 3-metilbenztiazolonhidrazon-6-szulfonsavat (SMBTH) és egyenként 1,7 mg K4[Fe(CN)6]-ot tartalmaz, a felettük elhelyezkedő egy-egy reagenshordozó 6 egység urikázt, 3 mg 7 pH-jú trisz-citrátpuffert és 20 egység peroxidázt (POD) tartalmaz. A száraz atmoszférában szobahőmérsékleten 1 éven át stabilis reagenscsíkokat a|2.példában leírt módon eluáljuk. ! A következő összetételű reagensoldatot nyerjük: Káliumfoszfát puffer (pH = 7,0) 0,1 mól/1 EHT 1 mmól/1 Detergens . 0,5% SMBTH 0,2 mmól/1 K4[Fe(CN)6] 20 mg/1 Urikáz 255 E/l POD 470 R/i A szérum húgysavtartalmát úgy határozzuk meg, hogy ennek a reagensoldatnak 2 ml-éhez a minta 0,050 ml-ét adjuk, és 20—25 °C-on 20 percig végzett inkubálás után meghatározzuk az extinkciót Hg 578 nm hullámhosszon, standardt összehasonlító oldattal szemben. Analóg módon vittük át reagenscsík-technikára a bejelentő ismert: glükóz (GOD/PAP), koleszterin (CHOD/PAP)-, és glutamátpiruvát-transzamináz (UI)tesztmódszerét. Ezek stabilitása és funkció-alkalmassága megfelel az előző példákban leírtaknak. Összehasonlító kísérletek A technika állásához tartozó, különböző reagenshordozók és a találmányunk szerinti reagenshordozó eluálási hányadának összehasonlítására hálóval különbözőképpen bevont, illetve felragasztott 3-(4,5-dimetiltiazolil-2-)-2,5-difeniltetrazoliumbromid-(MTT)-reagenspapírokat a 2. példában ismertetett előírás szerint (5—10 másodperces intenzív mozgatás 13 ml pufferoldattal, 5 perces állás, újabb 5—10 másodperces kezelés a pufferoldattal és mérés 450 nm-nél) kezelünk. Minden esetben 10x15 nines reagenspapírt használtunk, amelyet műanyagból készült fogantyúra erősítettünk (ragasztottunk) a mindenkori irodalmi adatok szerint. Összehasonlítás céljára egy ugyanilyen papírt fogantyú nélkül 15 percig extraháltunk a pufferben (teljes eluálás). Tesztcsíkok n X átl. eluálás X eluálás% *min. eluálás^ Xmax eluálás % MTT teljes eluálás 4 290 _ _ __ MTT felragasztva (DE-A 2 301 999 szerint 4 220 75,8% 72,4% 77,9% MTT hálóval bevonva (DE-A 2 118 455 szt). 4 222 76,5% 71,0% 79,3% Enzim (MTT hálóval bevonva (DE-A 2 118 455 szerint) 4 211 72,8% 67,9 % 75,9% Szitaszövet (MTT hálóval bevonva a találmány szerint 4 272 93,8% 91,0% 97,9% Szitaszövet (enzim) MTT hálóval bevonva a találmány szerint 4 258 88,9% 86,2% 91,0% Enzim (szitaszövet) MTT hálóval bevonva a találmány szerint 4 257 88,6% 85,2% 92,8% Mint az összehasonlító kísérleteket tartalmazó Táblázatból kitűnik, a találmány szerinti tesztpapírok jobban és gyorsabban eluálhatók. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Reagenscsík, amely fogantyúval és ennek alsó részére erősített, reagenssel impregnált, szívóképes hordozóval rendelkezik, azzal jellemezve, hogy a szít óképes hordozó egy azt borító, 50—250 /t lyukbőségű és 10—50 p szálvastagságú, a két ellentétes végen a fogantyúhoz ragasztott vagy hegesztett háló segítségével van rögzítve, és a hordozó és a fogantyú között vagy a hordozó két egymás felett elhelyezkedő rétege között 50—250 u lyukbőségű és 10—50 yx szálvastagságú közbenső háló van. 2. Az 1. igénypont szerinti reagenscsík kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a fogantyúra egymás mellett vagy egymás felett több szívóképes hordozó van rögzítve. 3. A 2. igénypont szerinti reagenscsík kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a különböző hordozók különféle reagenseket hordoznak. 4. Az 1—3. igénypont bármelyike szerinti rcagcnscsík kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a fogantyú és a háló(k) műanyagból és a szívóképes hordozó cellulózpapírból vagy poliamidból, illetve poliamid) cellulóz nemezből állnak. 5. Eljárás adott koncentrációjú reagensoldatok előállítására a szilárd reagenseknek a reagenscsíkból való kioldásával, azzal jellemezve, hogy az 1—4. igénypont bármelyike szerinti, az adott reagenst tartalmazó reagenscsíkokat az adott koncentrációhoz szükséges mennyiségű, oldáshoz alkalmas oldó- vagy hígítószerrel eluáljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
