185978. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetrapeptid-származékok előállítására
1 2 185 978 letű új peptidek védőhatást fejtenek ki a kísérletesen előidézett fertőzésekkel szemben. Ennek megfelelően, az I általános képletű új peptideket a patogén (kórokozó) mikroorganizmusok, és különösen a Gram-negatív baktériumok, továbbá Gram-pozitív baktériumok és gombák által kiváltott fertőző betegségek kezelésére használhatjuk. Továbbá, a II általános képletű és III általános képletű vegyületeket a biológiai hatást mutató I általános képletű vegyületek előállításának köztitermékeiként használhatjuk. Az I általános képletű új peptidek gyógyászati hasznosságát az alábbi farmakológiai kísérleti eredmények szemléltetik: Kísérletes fertőzéssel szemben mutatott védőhatás kimutatása egereken A találmány szerinti vegyületeknek a kísérletes fertőzésekkel szemben mutatott védőhatásának kimutatására a vizsgálandó anyagokból steril fiziológiás só-oldattal készítettük el a kívánt koncentrációjú oldatokat. A vizsgálatokhoz ICR-törzsbeli, 4 hetes hím egereket használtunk. Egy-egy csoportban 10 egér volt. Escherichia coli 22-t éjszakán át 37 °C hőmérsékleten tripszinnel emésztett kazeint tartalmazó szójás agaron (Trypticase Soy Agár) tenyésztettünk, majd a tenyészetből steril fiziológiás sóoldattal 2,6xlO'J CFU/ml (telepképző egység/ml) koncentrációjú szuszpenziót készítettünk. Minden egyes egérnek intraperitoneálisan 8,7xl07 CFU-t adtunk be. A vizsgálandó anyagok minden egyes dózisát 10—10 egérnek adtuk be 4 nappal a fertőzés előtt. A túlélés százalékát az injekciót követő 3. napon állapítottuk meg. Az eredményeket az alábbi táblázatban tüntettük fel: Táblázat Vizsgált vegyület Túlélés (%) (Példa száma) 0,1 mg/kg Dózis 0,01 mg/kg 0 3. példa 50 ÍUO 10 (2. lépés) 4. példa 80 30 30 (2. lépés) 5. példa 90 70 30 (2. lépés) A találmány szerinti vegyületekből előállítható gyógyászati készítmények lehetnek szilárd, félszilárd vagy folyékony halmazállapotú gyógyszerformák, amelyek a találmány szerinti hatóanyagot, továbbá valamely, külső, enterális (a gyomor- és bélrendszeren keresztül való) vagy parenterális (a gyomor- és bélrendszer megkerülésével való) adagolásra alkalmas, szerves vagy szervetlen vivőanyagot vagy hígítószert tartalmaznak. A gyógyszerformákban a hatóanyagot kísérhetik például a szokásos, nem-toxikus, gyógyászatilag elfogadható vivőanyagok, amelyeket általában használunk a tabletták, pirulák, kapszulák, kúpok, oldatok, emulziók, szuszpenziók és más, alkalmas gyógyszerformák készítésére. Vivőanyagként használhatunk vizet, glükózt, laktózt, gumiarábikumot, zselatint, mannitot, keményítőpasztát, magnéziumtriszilikátot, talkumot, kukoricakeményítőt, keratint, kolloid-szilícium-dioxidot, burgonyakeményítőt, karba-4 midot, és más olyan vivőanyagokat, amelyek alkalmasak a szilárd, félszilárd vagy cseppfolyós halmazállapotú gyógyszerformák előállítására, továbbá e készítmények tartalmazhatnak segédanyagokat, stabilizálószereket, sűg rítőszereket, színezőanyagokat és aromaanyagokat. A gyógyászati készítmények tartalmazhatnak továbbá konzerválószereket vagy bakteriosztatikus szereket, amelyek az adott készítmény hatóanyagát a lebomlástól megvédik. A találmány szerinti gyógyászati készítmények olyan 10 mennyiségben tartalmazzák a hatóanyagot, amely elegendő az adott betegség vagy állapot gyógyításához szükséges hatás kifejtéséhez. A gyógyászati készítményeket embereknek előnyösen intravénásán, intramuszkulárisan \agy orálisan adagoljuk. A találmány szerinti vegyüle- 1 g tek gyógyászatilag hatékony mennyisége függ ugyan a kezelni kívánt beteg korától és állapotától, de embereknek és állapotoknak általában testsúlykilogrammonként és naponta körülbelül 0,1 mg és körülbelül 100 mg közötti mennyiséget adunk be, és az átlagos egyszeri dózis álta- 20 ában körülbelül 50 mg, 100 mg, 250 mg és 500 mg ehet. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban — a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül — példákkal szemléltetjük. 25 A jelen leírásban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: Lac : laktoilcsoport, Alá : alanilcsoport, Glu : glutamilcsoport, Gly : glicilcsoport, 30 DAP: a, e-diamino-pimelilcsoport, Z : benziloxi-karbonilcsoport, Boc : tercier-butoxi-karbonil-csoport, Bzl : benzilcsoport, Ac : acetilcsoport. 35 Az aminosavak konfigurációját L- illetve D- jellel jelöljük. A (D) és (L) jelölés azt mutatja, hogy a megfelelő szubsztituens a mezoDAP D- illetve L-konfigurációjú részéhez csatlakozik. Amennyiben ez utóbbi jelölések a kapcsolódó csoport után vannak, az az N-terminális rész- 40 hez, ellenkező esetben a C-terminális részhez kapcsolódik. A y-D-Glu kifejezés azt jelenti, hogy a peptidlánc a D-Glu 7-szénatomján levő karboxilcsoporton keresztül folytatódik. 45 1. példa (E-reakcióegyenlet) 3,95 g[Z-(L)-Boc-(D)-mezoDAP]-(L)-GlyOBzl (1) és 0,85 g N-metil-morfolin 70 ml diklór-metánnal készült 50 elegyéhez -10-----15 °C hőmérsékleten hozzáadunk 0,95 g klórhangyasav-izobutil-észtert, és a reakcióelegyet félórán át ugyanezen a hőmérsékleten keverjük. Utána -40 °C hőmérsékletre hűtjük, majd hozzáadunk 15 ml etanolos 2 normál ammónia-oldatot. Az elegyet félórán át 55 ugyanezen a hőmérsékleten keverjük, majd az oldatot betöményítjük, és a maradékot etil-acetátban feloldjuk. Az etil-acetátos oldatot vízzel mossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. Az olajos maradékot dietil-éterrel eldörzsölve 3,1 g[Z-(L)-Boc- 60 -(D)-mezoDAP-(D)-NHi]-(L)-GlyOBzl-t (2) kapunk. IR-spektrum (nujol): 3300, 1735, 1685, 1655 cm-1. NMR-spektrum (CD3OD): Ô 1,48 (9H, s), 1,4—2,0 (6H, m), 4,03 (2H, s), 3,9-4,3 65 (2H, m),
