185928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-helyettesített 1-béta-D-ribofuranozil-1H-imidazo-[4,5-c] piridinek előállítására
1 185 928 2 0,39 g cím szerinti vegyületet kapunk monohidrátja formájában. A szűrletet 3 °C hőmérsékletre hűtve, majd szűrve és vízzel mosva, majd vákuumban szárítva egy második generációt kapunk, mellyel az összhozam 0,43 g, 40%. Analízis: Ci8H20N4O4. H20 Elméleti: C 57,74; H 5,92; N 14,96; Talált (első gén.) c 57, 54; H 5,93; N 14,98; Talált (második gen.) C 57,45; H 5,96; N 14,95; (%) UV spektrum (nm): Oldószer . Max. Min. 0,1 n HC1 268 236 0,1 n NaOH 273,5 238 5. példa 4-merkapto~l-$~D-ribofuranozil-lH~imidazo[4,5--c]-piridin 9,15 g (37,5 mmól) uridint és 4 g (26,5 mmól) 4-tioxo-imidazo[4,5-c]piridint [1. Rousseau R. J. és R. K. Robins, J. Hét. Chem. 2, 196. (1965)] szusz■pendálunk 65 ml, 0,1 mól/l-es, pH 7,4-es, 0,13% kálium-azidot tartalmazó kálium-foszfát-oldatban. Az elegyhez 634 NE. purin-nukleozid-foszforilázt és 116 NE. uridin-foszforilázt adunk, majd 37 °C- on tároljuk. 17 nap elteltével az előzőleg hozzáadott enzim mennyiségével azonos enzimmennyiséget adunk újra az elegyhez. Újabb 8 nap múlva ismét azonos mennyiségű enzimet adunk hozzá. 7 nap elteltével a reakcióelegyet vákuumban szárítjuk. A visszamaradó anyagot 150 ml n-propil-alkohol és víz 3:7 térfogatarányú elegyben szuszpendáljuk. A szuszpenziót leszűrjük, majd a szűrletet 7.5 x 90 cm-es, Bio Rad P-2, poliakrilamiddal töltött oszlopra visszük. Eluálószerként n-propil-alkohol, víz elegyet használunk. A termék zömét tartalmazó frakciókat- vákuumban szárítjuk. A visszamaradó anyagot 70 ml vízben szuszpendáljuk. A szuszpenziót leszűrjük, majd poliakrilamiddal töltött 5 x 90 cm méretű oszlopra visszük. Eluálószerként vizet használunk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. 142 mg terméket nyerünk monohidrát formában. A termék második generációját a szűrőpogácsákból nyeljük ki. A két szűrőpogácsát egyesítjük, 200 ml n-propil-alkohol, víz elegyben szuszpendáljuk, majd forrásban lévő vízfürdőn melegítjük. 5 perc elteltével a forró szuszpenziót leszűrjük. A szűrletet szobahőmérsékletre hűtjük és ismét leszűrjük. Ezután a szűrletet poliakrilamiddal töltött 7.5 x 90 cm méretű oszlopra visszük, majd az anyagot n-propanol, víz eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat rotációs desztilláló készüléken a kezdeti térfogat 50%-ára bepároljuk, ezzel a n-propanol jelentős részét eltávolítjuk. A képződött csapadékot kiszűrjük, 120 ml metil-alkoholban szuszpendáljuk és forrásig melegítjük. A forró szuszpenziót leszűrjük. A szűrőpogácsát kétszer mossuk 120 ml metil-alkohollal 25 °C hőmérsékleten, majd vákuumban szárítjuk. Ily módon 42%-os hozammal 3,22 g 4-merkapto-l-ß-D-ribofuramozil-1 H-imidazol[4,5-c]piridint nyerünk. Analízis: elméleti: C 46,64%, H 4,63%, N 14,83%, S 11,32%; talált: C 46,35%, H 4,65%, N 14,72%, S 11,22%. UV spektrum (nm): 0,1 n HC1; X^ = 225,334; 0,1 n NaOH; Xmx = 227,304. 6. példa 4- ( meíil-tio )-l~$-D-ribofuranozil-I H-imida~ zo[ 4,5~c Jpiridin 1,35 g (5,5 mmól) uridint, 0,68 g (4,1 mmól) 4-(metil-tio)-lH-imidazo[4,5-c]piridint, 0,14 g (1 mmól) kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,014 g (0,17 mmól) kálium-azidot 10 ml vízben szuszpendálunk. A szuszpenzió pH-ját kálium-hidroxiddal 7,4-re állítjuk be. Az elegyhez 320 egység purinnukleozid foszforilázt és 58 egység uridin foszforilázt adunk, majd 37 °C hőmérsékleten tároljuk. 19 nap múlva a meleg reakcióelegyet leszűrjük. A szűrletet lehűtjük, a lehűlés közben képződő kristályokat leszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 0,61 g 4-(metil-tio)-1 - ß-D-ribofuranozil-1 H-imidazo[4,5-c]piridint nyerünk. A 4-(metil-tio)-lH- imidazo[4,5-c]piridinre számított hozam 50%, a termék olvadáspontja 194-196 °C, az elméleti olvadáspont 195 °C. Analízis: elméleti: C 48,48%, H 5,09%, N 14,13%, S 10,78%; talált: C 48,46%, H 5,09%, N 14,12%, S 10,75%. UV spektrum (nm): pH 1-nél A.mai = 307,238 (váll.), 223 (váll.); pH 13-nál = 285. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) általános képletű 4-helyettesített-1 -ß-D-ribofuranozil-1 H-imidazo[4,5-c]piridinek előállítására, a képletben R jelentése halogénatom vagy amino-, merkapto-, (1-3 szénatomos)alkil-tio- vagy benzil-amino-csoport, azzal jellemezve, hogy valamely 4-R-lH-imidazo[4,5-c]piridint - ahol R jelentése a tárgyi körben megadott - pH 5-9 közötti tartományban, 3-70 °C hőmérsékleten, vizes vagy legfeljebb 50% vízzel elegyedő szerves oldószert, előnyösen 1-5 szénatomos alkanolt tartalmazó közegben, kémiai vagy enzimatikus úton ribozil-donorból és szervetlen foszfátból, előnyösen dikálium-hidrogén-foszfátból, kívánt esetben in situ előállított ribóz-1-foszfátot és valamely foszforiláz típusú enzimet tartalmazó ribozil-donor rendszerrel reagáltatunk, és kívánt esetben R jelentésében halogénatomot vagy védett, előnyösen benzilcsoporttal védett aminocsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet ismert módon R jelentésében aminocsoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületté alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy 4-halogén-lH-imida! 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 55 6
