185379. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új luteotróp releasing faktor monapeptid és dekapeptid származékainak előállítására
1 185 379 2 D-alanil-izoleucil-arginil-prolin-etilainid, -n-butilamid, -ciklopropilamid, -ciklohexilamid, -trifluormetilamid, -pentafluoretilamid és -2,2,2-trifluoretilamid és piro-glutamil-hisztidil-triptofil-szeril-tirozil-3-(2-naftil)D-alanil-norleucil-arginil-prolin-etilamid, -n-butilamid, -ciklopropilamid, -ciklohexilamid, -trifluormetilamid, -pentafluoretilamid és -2,2,2-trifluoretílamid. 6. példa a) 0,1 g 1. példa szerinti (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3- (2-naftil)-D-A:a-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 hidrogén-fluoriddal képzett sóját 50 ml vízben feloldjuk, és előzőleg ecetsawal ekvilibrált és ionmentes vízzel mosott 50 g Dowex 3 típusú gyantával töltött oszlopra visszük. Az oszlopot ionmentes vízzel mossuk, majd az eluátumot liofilizáljuk. így (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3-(2-naftil)D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 ecetsavval képezett sóját kapjuk, [a]” = —27,5° (c = 0,9, ecetsav). Ha a fenti módszert oly módon ismételjük, hogy a gyantát előzőleg ecetsav helyett más savval ekvilibráljuk, úgy a megfelelő sav-sókat, pl. hidrogén-kloriddal, hidrogén-bromiddal, kétisawal, foszforsavval, salétromsavval, benzoesawal és más hasonlókkal képzett sókat kapjuk. Hasonló módon egyéb 1 általános képletű vegyület savaddíciós sóját is előállíthatjuk. B) A kevéssé vízoldható sókat, a kívánt sónak megfelelő savat használva, vízből kicsaphatjuk. Például: Cink-tannát só előállítása: 10 mg/(piro)-Glu-His-Trp- Ser-Tyr-3-(2-naftil)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-G!y-NH2 ecetsavval képzett sójának 0,1 ml vízzel készített oldatát 8 mg tanninsav 0,08 ml 0,25 mólos NaOH-ban vett oldatával kezeljük. A kapott oldathoz azonnal 5 mg ZnS04 heptahidrát 0,1 ml vízzel készített oldatát adjuk. Az így kapott szuszpenziót pedig 1 ml vízzel hígítjuk, és a kivált csapadékot centrifugáljuk. A felülúszót dekantáljuk és a maradékot kétszer 1 ml vízzel mossuk, centrifugáljuk, és a felülúszót dekantáljuk. Parnoát só előállítása: 50 mg (piro)-Glu-Ilis-Trp-Ser- Tyr-3-(2-naftil)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 ecetsavas sójának 1,6 ml etanollal és 0,1 ml 0,25 mólos NaOH-val készített elegyéhez 11 mg pamoiksav 0,3 ml 0,25 mólos NaOH-val készített oldatát adjuk. Az oldószereket vákuumban lepároljuk és a maradékot 2 ml vízben szuszpendáljuk, majd centrifugáljuk, és a felülúszót dekantáljuk. A csapadékot 1,5 ml H20-val mossuk, centrifugáljuk és a felülúsztót dekantáljuk. A csapadékot vákuumban szárítjuk, és így 54 mg fenti LH-RH analóg parnoát sóját kapjuk. Hasonló módon egyéb vízben rosszul oldódó sót is előállíthatunk. C) Savaddíciós só előállítása szabad pepiidből 50 mg (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3-(2-naftil)-D-Ala- Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 vegyület szabad bázis formájában tartalmazó oldathoz 30 ml 1 n ecetsavat adunk. A kapott oldatot liofilizálva 50 mg fenti LH-RH analóg ecetsavas sóját kapjuk. Hasonló módon, ecetsav helyett egyéb savakat használva (a pepiidre vonatkoztatva azonos sztöchiometriai mennyiségben) az I általános képletű vegyület megfelelő savaddíciós sóit, pl. hidrogén-kloriddal, hidiogén-bromiddal, kénsavval, foszforsawal és salétromsavval képzett sóját kapjuk. D) Fém-kationnal képzett só, pl. cink-só előállítása 50 mg (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3-(2-naftil)-D-Ala- Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 ecetsavas sójának 0,4 ml 0,25 mólos NaOH-val, 0,3 ml vízzel és 1 ml etanollal készített elegyéhez 15 mg ZnS04 heptahidrát 0,2 ml vízzel készített oldatát adjuk. A kivált csapadékot centrifugáljuk, és a felülúszót dekantáljuk. A csapadékot 1 ml vízzel mossuk, centrifugálva, és a felülúszót dekantálva. Vákuumban való szárítás után 48 mg fenti LH-Rh analóg cink sóját kapjuk. Hasonló módon, egyéb többvegyértékű kationnal, pl. kalciummal, bizmuttal, báriummal, magnéziummal, alumíniummal, rézzel, kobalttal, nikkellel, kadmiummal, é; más, ezekhez hasonlóval képzett sókat is előállíthatunk. 7. példa 50 mg (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3-(2-naftil)-D-Ala- Leu-Aig-Pro-Gly-NH2 ecetsavas sójának 25 ml vízzel készített oldatát 50 g-os Dowex 1 oszlopra (erősen bázisos, kvaterner ammonium anion-cserélő gyanta) visszük, amelyet előzőleg-hidroxid-ion formába vitele céljából — NaOH oldattal ekvilibrálunk. Az oszlopot 150 ml vízzel eluáljuk és az eluátumot lifolizáljuk. így 45 mg szabad bázis formában lévő polipeptidet kapunk. Hasonló módon, az (I) általános képletű vegyületek egyéb savaddíciós sóiból — pl. amelyeket a 6. példában ismertettünk - is előállíthatjuk a megfelelő bázisokat. S. példa Az alábbi tipikus gyógyászati kompozíciók hatóanyagként egy találmány szerinti előállítási eljárással kapott vegyületet, pl. (piro)-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-3-(2- naftil)-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 vegyületet vagy gyógyászatilag megfelelő sóját, pl. ecetsavas-, cink-, cinktannát-sóját tartalmazzák. A) Buccális (pl. szublinguális) adagolásra alkalmas tablette kompozíciók: 1. LH-RH Analóg 50,0 pg préselhető cukor, USP 96,0 mg kálcmm-sztearát 4,0 mg 2. LH-RH Analóg 30,0 pg préselhető cukor, USP 98,5 mg magnézium-sztearát 1,5 mg 3. LH-RH Analóg 25,0 pg mannitol, USP 88,5 mg magnézium-sztearát, USP 1,5 mg zselatinnal bevont keményítő, USP 10,0 mg 4. LH-RH Analóg 200,0 pg laktc'z, USP 83,3 mg zselatinnal bevont keményítő, USP 15,0 mg magnézium-sztearát, USP 1,5 mg Készítési mód a) A : LH-RH analógot feloldjuk annyi vízben, hogy a töltőanyag cukor komponensével történő összekeverése-11 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
