185315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldható immunstimuláns glikoproteinak előállítására Klebsiella Pneumoniaeból
185 315 2 Mitogén hatás: A szérum albumin intravénás beadása után 2 órával a túlélő állatokat leöljük és a térdhajlati ganglionokat — melyek az injekció helyénél a lábat kivezetik - eltávolítjuk és súlyukat megmérjük. A mitogén hatást a vizsgált vegyülettel kezelt állatok és a csak szérum albumint kapott kontrol] állatok ganglionjai közepes súlyértékeinek arányával jellemezzük. Eredmények: A vegyület index pcldaszáma 1 6,2 2 5,0 A kapott eredmények alapján az 1. és 2. példa szerinti vegyületek igen jó immunstimuláns és mitogén hatással rendelkeznek. B. A nem-specifikus védőrendszer stimulálása E hatást a Halpern által kidolgozott szén-clearence teszt alapján jellemezzük, mely szerint kolloid szén szuszpenziót injektálunk az állat szemüregébe és az idő függvényében optikai sűrűség-méréssel a szén vérbe való bejutásának kinetikáját meghatározzuk. A vizsgált vcgyületeket 24 és 48 órával a teszt előtt intraperitoneálisan adagoljuk. Az eredményeket a szénrészecskék eliminációjának százalékában adjuk meg, kontrollként a csak kolloidáüs szénrészecskéket kapott állatok esetén a szénrészecskeszámot 100%-nak véve. Eredmények: Kontrolihoz viszonyított A vegyület Dózis hatás, (%) példaszáma (mg/kg) 8 perccel az 30 perccel az injekció után injekció után 1 0,25 50 70 2 0,25 60 70 Fentiek alapján a szervezet védekezését a két vegyület stimulálja. C Akut toxicités Behrens és Karber módszerével egereken intraperitoneális adagolással határozzuk meg az 50 %-os pusztulást okozó dózis (LDjo) értékeket. Az 1. és 2. példa szerinti vegyületek esetén LD50 = = 30 mg/kg. 5 D. Tolerancia Az 1, és 2. példa szerinti vegyületek 1000 7/kg dózisban való 0,2 ml-es szubkután injekciója egereken semmiféle helyi vagy általános intoleranciát nem okoz. 10 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 20-35% fehérjét, 50—70% neutrális 15 aldózokat, 3—8% glükuronsavat és 1,5— 3% aldózaminokat tartalmazó 100 000 daltonnái nagyobb molekulasúlyú, Klebsiella pneumoniae-bői extrahált vízoldható immunstimuláns glikoproteinek előállítására, azzá/ jellemezve, hogy Klebsiella pneumoniae kultúra lizátum 20 extraktumának dialízist alkalmazó szűrésével kapott glikoprotein oldatát egy kvaterner ammonium vegyülettel kezeljük, a felülúszót — mely a glikoproteinsóoldata — a kapott csapadék elkülönítése után hidegen kis molekulasúlyú alkanollal kezeljük, és az így kapott 25 csapadékot vízben ismét feloldjuk, kívánt esetben dializáljuk, majd liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy- kvaterner ammonium vegyületként cetil-trimetil-30 ammónium-bromidot használunk;- a felülúszót centrifugálással különítjük el;- kis molekulasúlyú alkanolként etanolt használunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosí- 35 tási módja, azzal jellemezve, hogy a glikoproteineket a Pasteur Intézetben 52 145 számon letétbe helyezett törzsből extraháljuk. 4. Az 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fehérjefrakció 40 30% savanyú aminosavat tartalmaz. 5. Az 1., 2., 3. vagy 4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a poliszacbarid frakció 1 molekula glükózra vonatkoztatottan 1-1,5 molekula mannózt, 1-1,5 molekula 45 glükuronsavat és 2—2,5 molekula galaktózt tartalmaz. 6. Eljárás baktérium és vírusellenes hatású gyógyászati kompozíció előállítására, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként az 1. igénypont szerinti glikoproteint a gyógyszerkészítésben szokásos vivőanyagokkal és 50 kívánt esetben segédanyagokkal összekeverjük. 7. Eljárás baktérium és vírusellenes hatású gyógyászati kompozíció előállítására, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a 3—5. igénypontok bármelyike szerinti glikoproteint a gyógyszerkészítésben szokásos vivő-55 anyagokkal és kívánt esetben segédanyagokkal összekeverjük. ra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent a Műszak Könyvkiadó gondozásában 4 COPYLUX Nyomdaipar, és Sokszorosító Kisszövetkezet
