185302. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Digitális Lanata szívglikozidjainak a szétválasztására és egy vagy több komponens tiszta alakban történő kinyerésére
1 185 302 2 A találmány tárgya eljárás a Digitalis lanata szívglikozidjainak a szétválasztására és egy vagy több komponens tiszta alakban történő kinyerésére. Közelebbről a találmány tárgya eljárás a Digitalis lanata primer vagy szekunder szívglikozidjainak, főleg az A, B és C lanatozid, illetve a digoxin oszlopkromatográfiás elválasztására és tiszta, kristályos alakban történő előállítására. A Digitalis lanata növényből úgynevezett primer és szekunder szívglikozidok állíthatók elő. A friss növényből enzimgátlók, például ammóniumszulfát vagy nátriumklorid jelenlétében végzett extrakcióval vagy a kíméletesen szárított növényből ugyancsak extrakcióval állítják elő a primer glikozidok keverékét. Ebből a nyers glikozidkeverékből újabb extrakcióval eltávolítják a lipoidokat, rezinoidokat, klorofillt és egyéb szennyezéseket, majd az így kapott, dúsított glikozidkeveréket tovább tisztítják. A Digitalis lanata növény olyan enzimrendszert tartalmaz, amely a primer (úgynevezett genuin) szívglikozidok molekulájában a cukorlánc részleges lehasítására képes, így keletkeznek a szekunder glikozidok. Ezeknek az ipari előállítására több módszer ismeretes, így előállithatók az izolált primer glikozidok részleges hidrolízisével vagy a növényben jelen levő enzimek segítségével. Az így kapott szekunder glikozidkeveréket extrakcióval kinyerik, majd újabb extrakcióval eltávolítják a ballasztanyagokat, és a ketetkező, dúsított giikozidkeveréket tovább tisztítják. A dúsított glikozidkeverékekből különféle módokon állítják elő a tiszta primer és szekunder szívglikozidokat, így például frakciónak kristályosítással vagy ellenáramú oldószeres extrakcióval. Az első eljárás hátránya, hogy a nagyszámú szívglikozid és a még mindig tekintélyes mennyiségben jelen levő egyéb kísérőanyagok mellől rossz hatásfokkal, nem a kívánt tisztaságban és viszonylag nagy mennyiségű oldószer felhasználásával állítják elő a kívánt, különösen hatékony szívglikozidokat. A másik eljárásmód hátránya, hogy a részlegesen tisztított, nagyszámú komponenst tartalmazó glikozidkeverék komponenseinek hatékony szétválasztására nem alkalmas, csak néhány glikozidot tartalmazó keverék komponenseinek a szétválasztását lehet vele elérni. Ehhez több oldószer bizonyos arányú elegyeit használják, ezeknek nagy része nem regenerálható, ez növeli az eljárás költségeit. A Digitalis-glikozidok különböző vizsgálataira és tiszta alakban való előállítására egyre szélesebb körben alkalmazzák az oszloprendszerü és síkelrendezésü kromatográfiás módszereket. A sí kelrendezésű módszereket (klasszikus papírkromutográfia, rétegkromatográfia stb.) elsősorban analitikai célra, míg az oszloprendszerü módszereket elsősorban preparatív célra használják. A kétféle folyadékkromatográfiás technika kö zötti elvi kapcsolat nyilvánvaló. Ennek ellenére a kedvező rétegkromatográfiás elválasztási eredményeket nem lehet mindig egyértelműen oszlopkromatográfiás viszonyok közé átvinni. A két technika közötti nagyrészt tisztázatlan kapcsolatokkal is magyarázható, hogy a Digitalis-glikozidok oszlopkromatográfiás és analitikai elválasztására a gyakorlatban eltérő oldószerrendszereket és szorbenseket használnak. így a rétegkromatográfiás elválasztást általában szilikagél-gipsz (5: 1) szorbensrétegen 5 : l : 4 : 0,1 arányú kloroform-metanol-metilén-klorid-víz oldószereleggyel (Farm. Obzor, 35, 450. [1966]), nem aktivált szilikagél G rétegen 9: 1 arányú kloroform-metanol eleggyel (Farm. Weekbl., 104, 877. [1969]), propilénglikollal impregnált cellulózrétegen propilénglikollal telített, 90: 10 arányú benzol-etilacetát eleggyel (J. Chromatogr., 35, 122. [1968]), míg formamiddal impregnált HPTLC szilikagél 60 F254 rétegen 7 : 10,5 arányú xiloi-metíletilketon vagy 5:11:0,5 arányú kloroform-tetrahidrofurán-formamid eleggyel (J. Chromatogr., 138, 238. [1977]) végzik. A Digitalis-glikozidok ipari méretű, oszlopkromatográfiás szétválasztására az jellemző, hogy viszonylag tiszta glikozidkeveréket visznek fel az oszlopra, és az eluálást több oldószer, illetve oldószerelegy egymás után való adagolásával (többlépcsős elucióval) végzik. így az 57 742 számú román szabadalmi leírás szerint a glikozid keveréket formamiddal impregnált alumíniumoxid oszlopra viszik, és formamiddal telített, 99 : 1 arányú kloroformmetanol eleggyel, majd 98,5: 1,5 arányú kloroform-metanol eleggyel, végül 98 : 2 arányú kloroform-metanol eleggyel eluálják. Az 57 006 számú román szabadalmi leírás szerint az eluálást különböző arányú, formamiddal telített metilénkloridmetanol elegyekkel végzik. Szorbensként az aiumíniumoxid helyett szilikagél oszlopot is használnak. A többlépcsős elució rendkívül megnehezíti az oldószervisszanyerést, a tisztítás nagyon költséges és az oldószereiegy ismételt felhasználása gyakorlatilag lehetetlen, ezenkívül nagy az oldószerfelhasználás. Az oszlop impregnálásához használt formamid részleges hidrolízise pedig a szívglikozidok hidrolíziséhez vezethet. Végül további hátrány az is, hogy az eluensböl általában nem végezhető el a kristályosítás, különösen nehéz ez a formamidot tartalmazó rendszerek esetén. A találmány feladata, hogy a Digitalis lanata primer és szekunder glikozidjainak a szétválasztásához olyan oldószereket vagy oldószerelegyeket nyújtson, amelyek az említett glikozidokat jól oldják, ugyanakkor jól regenerálhatok és ismételten felhasználhatok, valamint olyan szorbenseket is biztosítson, amelyeknek jó az elválasztóképessége és amelyek regenerálás nélkül többször használhatók. A találmány alapja az a felismerés, hogy a Digitalis lanata primer és szekunder glikozidjai egy rövidszénláncú alifás alkohollal vagy annak vízzel vagy valamely halogénezett szénhidrogénnel alkotott elegyével magnézíum-szílikát oszlopon vagy egy rövidszénláncú alifás alkohol és víz elegyével políamid oszlopon hatékonyan elválaszthatók, a szorbens oszlopok régenerálás nélkül többször felhasználhatok és a glikozidok az eluens oldatából bepárlással közvetlenül kristályosíthatok. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a Digitalis lanata primer vagy szekunder glikozidjainak dúsított keverékét a) 1-4 szénatomos alifás alkoholban vagy annak 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
