185264. lajstromszámú szabadalom • Javított mikrobiológiai eljárás androsztán szteroidok előállítására
1 .185 264 2 4. táblázat A képződött ADD mennyisége (g) inkubáció tartama (óra) tojássárgája adalék — 130 180 Nincs 1,65 2,65 Van 2.65 3.27 6. példa 1,0% glükózt, 1,0% húskivonatot, 1,0% peptont és a fennmaradó részben vizet tartalmazó oltó tápközeget (pH - 7,2) készítünk. Ebből az oltó tápközegből 100 ml mennyiséget töltünk 500 ml ürtaltalmú rázólombikba. A lombikot és tartalmát autoklávban 15 percen át 120 'C hőmérsékleten sterilizáljuk. A közeget oltókacsnyi M. parafortuitum komplex MCI 0807-tel inokuláljuk, majd az inokulált közeget 48 órán át 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk, vibrációs rázógépen percenként 120 (7 cm kitérésű) lökettel rázva. Főfermentációs táptalajt készítünk, melynek pH-ja 7,0 és azt autoklávban 20 percen át 120 °C hőmérsékleten sterilizáljuk, majd 2 ml oltó tápközeggel inokuláljuk. A tápközeg összetétele: 4,0% porított teljes szójabab 0,2% K2HP04 2,0% koleszterin a többi víz. 0,2% NaN03 0,!% MgS04. 7H20 különböző %-nyi tojássárgája (5. tábl.) A főfermentációt 30 °C hőmérsékleten 110 órán át folytatjuk, vibrációs rázógépen percenként 120 (7 cm kitérésű) lökettel rázva a közeget. A kezelt fermentlevet kétszer extraháljuk 200-200 ml etilacetáttal. A kombinált extraktumokról leszűrjük az oldhatatlan közeget, pl. sejtet, a 4AD célterméktartalmat gázkromatográfiás elemzéssel határozzuk meg. Az eredményeket a túloldali 5. táblázat mutatja. 7. példa i ,0% glükózt, 1,0% húskivonatot, 1,0% peptont és a fennmaradó részben vizet tartalmazó oltó tápközeget (pH = 7,2) készítünk. Ebből az oltó tápközegből 100 ml mennyiséget töltünk 500 ml ürtartalmú rázólombikba. A lombikot és tartalmát autoklávban 15 percen át 120 'C hőmérsékleten sterilizáljuk. A közeget oltókacsnyi M. parafortuitum komplex MCI 0807-tel inokuláljuk, majd az inokulált közeget 48 órán át 30 *C hőmérsékleten inkubáljuk, vibrációs rázógépen percenként 120 (7 cm kitérésű) lökettel rázva a közeget. Főfermentációs táptalajt készítünk, melynek pH-ja 7,0 és azt autoklávban 20 percen át 120 4C hőmérsékleten sterilizáljuk, majd 20 ml oltó tápközeggel inokuláljuk. A tápközeg összetétele: 2,0% porított, 2,0% élesztő zsírtalanított szójabab : 1,0% szárított 0,2% NaNo3 tojássárgája 0,2% K2HP04 0,1% MgS04. 7 H20 5 2,0% koleszterin a többi víz. 5. táblázat 10 15 . 20 25 30 Egyenként 6 liter ürtartalmú két (2) rázólombik közül az egyikbe a fenti összetételű főfermentációs táptalajból töltünk 800 ml-nyit, a másikba egyébként egyező összetételű, de tojássárgáját nem tar- 35 talmazó táptalajból 800 ml-nyit. A főfermentációt 30 *C hőmérsékleten vezetjük le, vibrációs rázógépen percenként 100 (7 cm kitérésű) lökettel rázva a közeget. A 6. táblázatban megadott időközönként 20 ml-nyi mintákat veszünk 40 mindegyik lombikból, a mintát 60 ml etil-acetáttal extraháljuk, majd elemezzük. A 4AD célterméktartalmat a 6. táblázat mutatja. Szárított tojássárgája-Képződött 4AD tartalom (%) (g) 0 0,20 0.1 0,29 0,2 0,31 0,3 0,39 0,5 0,45 0,7 0,50 1,0 0,50 1,5 0,48 2,0 0,42 3.0 0,40 4.0 0,30 7,0 0,25 inkubációs idő (óra) 4AD tartalom (mg) tojássárgája adalék nincs van 48 7 27 72 20 57 96 37 82 120 52 100 144 77 105 168 90 105 192 95 100 8. példa A 6. példa szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy szárított tojássárgája helyett nyers tojássárgája az adalék. Az eredményeket a 7. táblázat mutatja. 6
