185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
1 185238 2 az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot n-hexánból kikrislályosítjuk, majd szűréssel elkülönítjük. Kitermelés 5,0 g, az elméleti hozam 67,0%-a. Op. 56-58 °C. Elemi analízis a C10H13O3SCl képlet alapján: számított: C 48,29% H 5,27% S 12,89% Cl 14,26% talált: C 48,42% H 5,21% S 12,61% Cl 14,25% (3) Z-Arg(Mtr)OH.CHA szintézise 10 ml 4 n nátriumhidroxid-oldat és 40 ml acélon elegyében feloldunk 2,83 g Z-Arg-OH-t és az oldatot jéggel hűtjük. Ezután 4,0 g 4-metoxi-2,3,6- trimetilbenzolszulfonilklorid 10 ml acetonnal készített oldatát adjuk az oldathoz és az elegyet 3 óra hosszat keverjük, majd vizes citromsavat adunk hozzá. Az acetont ledesztilláljuk és a kívánt terméket etilacetáttal extraháljuk. Az oldószert desztillációval eltávolítjuk és így 4,8 g olajos anyagot kapunk. Az anyagot kis mennyiségű etilacetátban oldjuk és 1,04 ml ciklohexilamin hozzáadásával kikristályosítjuk. A keletkező kristályokat metanol-etilacetát elegyből átkristályosítjuk. Kitermelés 4,10 g, az elméleti hozam 72,1%-a. Op. 195-197 °C. [aß+ 6,5° (c = 1,18, metanol). Elemi analízis a C30H4SO7N5S képlet alapján: számított: C 58,14% H 7,32% N 11,30% S 5,17% talált: C 58,08% H 7,34% N 11,58% S 5,32% (4) H-Arg(Mtr)-OH szintézise 30 ml etilacetátban 1,5 g Z-Arg(Mtr)-OH.CHA-t szuszpendálunk és a szuszpenzióhoz hozzáadunk 15 ml 0,2 n kénsavat. Az elegyet alaposan rázzuk, vízzel mossuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot metanolban oldjuk és a katalitikus redukciót palládiumkorom-katalizátor jelenlétében végezzük. Ezután a katalizátort szűréssel elkülönítjük és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz vizet adunk és a keletkező kristályos anyagot szűréssel kinyerjük. Kitermelés 0,77 g, az elméleti hozam 81%-a. Op. 100-103 °C. [aß -4,8° (c = 1,30, metanol). Elemi analízis a C,6H2605N4S • Vi H2Ö képlet alapján: számított: C 48,59% H 6,88% N 14,18% S 8,11% talált: C 48,78% H 7,16% N 13,88% S 8,29% Kísérleti példa 2 ml 9 : 1 arányú Irifiuorccelsav-tioanizolclcgyben feloldunk 20 mg H-Arg(Mtr)-OH-l és az oldatot állni hagyjuk a 3. táblázatban megadott körülmények között. Az oldatból 100-100 pl-es adagokat 10-10 ml-re növelünk és argininre megelemezzük. Az eredményeket a 3. táblázat mutatja. J. táblázat Hőmér-Idő Argséklet (óra) kitenne(°C) lés (%) 23 H-Arg(Mtr)-OH 50 0,5 1 0,5 68.3 85.4 88,9 U 84,9 A 3. táblázatból látható, hogy kinyerhető 23 °C-on 1 óra alatt. az iMtr könnyen 24. példa (1) Boc-Tyr-Arg(Mtr)-OH szintézise 20 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,80 g HArg(Pme)-OH-t. Ezután 0,34 ml trietilamint és Boc-Tyr-ONB-t (amelyet 0,57 g Boc-Tyr-OH-ból, 0,40 g HONB-ből és 0,50 g DCC-ből állítunk elő) adunk az oldathoz hidegen, majd az elegyet szobahőmérsékleten 15 óra hosszat keverjük. Ezután az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot citromsavval megsavanyítjuk, majd etilacetáttal extraháljuk. Az etilaceíátos réteget vízzel mossuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot kloroformban oldjuk és egy 4 x 6 cm méretű szilikagél oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást 5%-os MeOH-CHCl3elegygyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, betöményítjük és éterből kicsapjuk, a keletkező port pedig szűréssel elkülönítjük. Kitermelés 0,6 g, az elméleti hozam 51,5%-a. Op. 114-121 °C. [aß + 1,2° (c = 0,4, dimetilformamid). Elemi analízis a C30H43O9N5S képlet alapján: számított: C 55,45% H 6,67% N 10,78% S 4,94% talált: C 55,12% H 6,83% N 10,53% S 4,54% (2) H-Tyr-Arg-OH (Kyotorphin) szintézise 5 ml 9 : 1 arányú trifluorecetsav-tioanizolelegyben feloldunk 400 mg Boc-Tyr-Arg(Mtr)OH-t és a kapott oldatot 2 óra hosszat állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A trifiuorecetsavat csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a maradékhoz étert adunk és a keletkező csapadékot szűréssel elkülönítjük. A csapadékot kis mennyiségű vízben oldjuk és egy 1 x 10 cm méretű Amberlite IRA410 (acetát-forma) oszlopra visszük és liofilizáljuk. A liofilizátumot kis mennyiségű vízben oldjuk és egy 2,2 x 8 cm méretű karboximetilcellulóz oszlopon kromatografáljuk, az eluálást a lineáris fokozatosság módszerével végezzük, amelynek során 300 ml vizet és 300 ml 0,1 mólos ammóniumacetát-oldatot használunk. A 100-150 ml-es frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. Kitermelés 175 mg. [aß - 17,4° (c = 0,5, H20); aminosav-analízis (savas hidrolízis): Arg 1,00(1), Tyr 0,94(1); Átlagos kihozatal 86,5% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 12
