185238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás guanidino-csoportot tartalmazó peptidek előállítására
1 185 238 2 A találmány tárgya eljárás guanidinocsoportot tartalmazó peptidek előállítására, mely eljárás során új (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil guanidino-védőcsoportot alkalmazunk. A peptidek előállításánál kiindulási anyagként használt és —NH— guanidinocsoportot tartalmazó vegyületek (például az arginin) guanidinocsoportját meg kell védeni. Valamely guanidinocsoport megvédését szokásosan nitrocsoporltal vagy lozilcsoportlal végzik. A Pepi. Chem. 18 21-24 (1980), Pept. Chem. 16 1-4 (1978), Khim. Prir. Soedin 77 (1) 69-73 (1975), Chem. Pharm. Bull. 26 (4) 1220-30 ( 1978) és a 2. 528 935 sz. NSZK közrebocsátási irat p-metoxibcnzol-szulfonil(Mbs), 2,4,6-trimetilbenzolszulfonil-(Mts). és tozil (Tos) védőcsoportokat ismertet. Ezek azonban csak egy erős savval - például hidrogén-fluoriddal - való kezeléssel távolíthatók el, mely erős sav alkalmazása azonban nem kívánt mellékhatásokat így például a peptid más részeinek elbomlását vagy melléktermékek képződését eredményezi és a peptid kitermelést csökkenti. E hátrányok elkerülése érdekében új szintetikus módszert dolgoztunk ki és valósítottunk meg, amelynek során bizonyos guanidino-védöcsoportokat használunk, amelyek könnyen eltávolíthatók metánszulfonsavval (100 030/1976 számú japán szabadalmi leírás, mely megfelel a 3 997 516 számú egyesült államokbeli szabadalomnak). A guanidinocsoport megvédési lehetőségeinek további tanulmányozása során arra a (elismerésre jutottunk, hogy a 4-meloxi-2,6-dimelilbenzolszulfonil-, a pentametil-benzolszulfonil-, a 2,4,6-trimetoxibenzolszulfonil-, a 4-metoxi-2,3,5,6,-tétrametilbenzolszulfonil- és a 4-metoxi 2,3,6,-trimetilbenzolszulfinil-csoport könnyen eltávolítható a megfelelő védett aminosavakról vagy peptidekröl enyhén savas körülmények között. A találmány tárgya tehát eljárás guanidinocsoportot tartalmazó peptidek előállítására, amelynek során valamely guanidinocsoportot tartalmazó kiindulási anyag guanidinocsoportját valamely (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonilcsoporltal védjük, ahol R,, R3 és Rs metil- vagy metoxiesoport, R2 és R4 pedig hidrogénatom vagy metilcsoport, azzal a kikötéssel, hogy amennyiben R, metilcsoport, akkor R,, R2, R4 és R5 metilcsoport; ha R3 metoxiesoport, akkor R2 és R4 hidrogénatom, R, és R5 pedig metoxiesoport, vagy ha R3 metoxiesoport és ugyanakkor R, és R5 metilcsoport, akkor R2 hidrogénatom vagy metilcsoport és R4 hidrogénatom vagy metilcsoport és a védett vegyületet peptidszintézis reakciónak vetjük alá, majd a védőcsoportot savval, így trifluorecetsavval, metánszulfonsavval vagy vízmentes hidrogéntluoriddal eltávolítjuk. Az (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoporlnak a guanidinocsoportot tartalmazó kiindulási vegyület guanidinocsoportjára történő rávitele előtt az a-amino-csoportot a guanidinocsoportot tartalmazó vegyületben megvédjük. Az uamino-csoport megvédését valamely hagyományos védőcsoport segítségével végezhetjük. Például a (II) általános képletü vegyületben R0 védöcsoportként a benziloxikarbonil-, p-nitrobenzil-oxikarbonil-, pmetoxibenziloxikarbonil-, terc-butoxikarbonil-, terc-amiloxikarbonil-, 9-fluorenilmetoxikarboniI-, izonikotiniloxikarbonil-, o-nitrofenilszulfenil-, 2- (p-bifenil)izopropiloxikarbonil-csoportot említjük, e csoport önmagában ismert módon vihető be a molekulába. Különösen előnyösek erre a célra a benziloxikarbonil- és a terc-butoxikarbonil-csoportok. A guanidinocsoportot és ily módon védett aaminocsoporlöt tartalmazó vegyület guanidinocsoportját ezután valamely (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoporttal reagáitatjuk. Ezt a reakciói úgy végezzük, hogy körülbelül 1-5 egyenértéknyi, előnyösen körülbelül 1-2 egyenérléknyi (I) általános képletnek megfelelő helyettesített benzolszulfonil-kloridot reagáltatunk a guanidinocsoportot tartalmazó vegyülettel. A 4-metoxi-2,3,6,-trimelil-benzolszulfonilkloridot, az (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoportok egyikét tartalmazó vegyületet, kristályos formában állíthatjuk elő izomer keletkezése nélkül oly módon, hogy 2,3,5-trimetilanizolt klórszulfonsavval reagáltatunk. Valamely (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoportnak a bevitelét előnyösen valamely bázis jelenlétében végezzük. A bázis például nálriumhidroxid, káliumhidroxid és lítiumhidroxid lehet. Körülbelül 1-10 egyenértéknyi, előnyösen körülbelül 1-5 egyenértéknyi bázist használunk egy mól guanidinocsoportot tartalmazó vegyületre. A reakciót szokásosan, kívánt esetben alkalmas oldószerben, így vízben, acetonban, dioxánban, dimetilformamidban vagy tetrahidrofuránban vagy ilyen oldószerek elegyében vitelezzük ki. A reakciót - 10 °C és +25 °C, előnyösen -5 °C és +10 °C közötti hőmérsékleten játszatjuk le. Valamely (í) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoporttal védett guanidinocsoporttal rendelkező, guanidinocsoport tartalmú keletkező vegyületet szabad formában vagy ciklohexilaminná. diciklohexiiaminná, nátriumsóvá vagy más sóvá történt átalakítása után önmagában ismert hagyományos módon a kívánt peptidkondenzációs reakciónak vetünk alá. Valamely (I) általános képletü helyettesített benzolszulfonil-csoporttal védett guanidinocsoporttal rendelkező guanidinocsoport tartalmú vegyületet kívánt peptidkondenzációs reakciónak vetünk alá, ahogy már említettük. Ilyen hagyományos módon végzett peptidkondenzációs reakció példájaként a következő módszereket említhetjük meg: M. Bodansky és M. A. Ondett: Peptide Synthenis (Interscience, New York 1966). F. M. Finn and K. Hormann: The Proteins, Vol. 2, H. Nenrath, R. L. Hil! kiadó, Academie Press Inc., New York 1976; Izumiya N. és misai.: Peptide Gosei (Peptide Synthesis). Maruzen (K. K.) 1975, és hasonló módszerek, így az azid-módszer, kloridntódszer, savanhidridmódszer, kevert savanhidrid-módszer, DCC- módszer, aktivált észter-módszer, a Woodwardféle K-reagenst alkalmazó módszert, karbodiimidazol-módszer, redox-módszer, DCC-HONB módszer és hasonló módszerek. A peptidkondenzációs reakció végrehajtása után 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
