185151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-karboxi-alkanoil-indolin.2-karbonsav-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

185 151

2

A találmány szerinti vegyületek kardiova:zkuláris farmakológiája

A találmány szerinti vegyületek hatását az angiotenzint átalakító enzim (angiotensin converting enzyme = = ACE) gátlásának kiértékelésére szolgáló módszerekkel vizsgáltuk. Az in vitro ACE-gátlás (ACE inhibition = ACEI) biokémiai megítélésénél a vegyület aktivitását nyúl-tüdőszövetben határoztuk meg.

Az in vivo vizsgálati módszer során először az angiotenzin I (AI) beadásával vérnyomás-növekedést idéztünk elő a kísérleti állatnál. Ezután mértük az egyes vegyüieteknek erre a vérnyomásnövekedésre gyakorolt gátló hatását.

I. biokémiai tesztmódszer

Az ACE meghatározására nyűl-Uidőszövet-preparátumot. [Das and Saffer, J. Biol. Chem. 250, 6762 (1975)] alkalmaztunk Cheung és Cushman módszere szerint [Cheung and Cushman, Biochim. Biophys Acta 293, 451 (1973)]. Ez a módszer spektrofotometriásán határozza meg egy szintetikus szubsztrátumból 37°-on végzett 30 perces inkubálás alatt szabaddá vált hisztídil-leucin mennyiségét. Ezután az ACE-gátlás 1CS0 -értékeit grafikusan számítjuk ki. Az ICS0-érték megvizsgált vegyületnek az a koncentrációja (mólokban), amely a hisztidil-leucinnak a vizsgált anyag távollétében keletkező mennyiségét 50 %-kal csökkenti.

II. Az angiotenzin I (AI) által előidézett vémyomásnövekedésnek a teszt-vegyületek intravénás beadása által való gátlásának vizsgálati módszere (Ál-gátlás %)

Ezen vizsgálatok során, mint azt a fentiekben ismertettük, egy-egy katétert vezetünk be a patkány combartériájába és lábikravénájába. Az arteriális nyomást az artéria-katéterből kiindulva regisztráljuk, mialatt angiotenzin I-et (AI) és az egyes teszt-vegyületeket a vénás katéteren keresztül injektáljuk. Az angiotenzin I által előidézett vérnyomásnövekedés gátlását a táblázatban átlagértékként szemléltetjük, 30 perccel a mindenkori vegyület megválasztott dózisának beadása után. Ennek során az adagokat úgy választottuk meg, hogy többek között az ID50-érték (i.v.) is meghatározható legyen.

Eredmények:

Az alábbi

ln vitro

Az angiotenzin I (AI) által cló'idézett

példa sze-ACEI

vérnyomásnövekedés gátlása

rinti ve gyű-i.v. dózis:

Ai %

let

ICS0 (mól):

(mg/kg)

gátlás:

2

3 X 10~7

10

77

6/5

6 X 10"*

10

70

5

4 X 10"8

10

71

12/a

3 X 10"8

ID50:0.23 mg/kg

8/a

6 X 10"s

1D50:0.29 mg/kg

12/b

4 X 10'8

1.0

95

0.1

37

8/b

1 X 10"s

0.1

32

6/1

3 X 10"7

13

1 X 10"5

0.1

80

14/c

5 X lO"9

0.1

61

21

5 X 10'8

1.0

80

23/c

1 X 10"7

23/b

5 X 10'7

23/a

4 X 10"6

25. példa

5,0 g (31 mmól) indol-2-karbonsav, 10,8 ml (77,5 mmól) trietil-amin és 400 mg 4-dimetíl-amino-piridin 50 ml toluollal készített oldatához 6,1 g 4-metoxi-karbonil-butiril-kloridot adunk. A reakciókeveréket éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, 100 ml vízzel és 50 ml telített vizes nátrium-hidroxid-oldattal elegyítjük, majd 1 órán át tovább keverjük. A rétegeket szétválasztjuk, a vizes réteget 12n hidrogén-klorid oldattal 1 -es pH-értékre állítjuk be és 50-50 ml metilén-kloríddal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat magnézium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A kapott l-[4- -(metoxi-karbonil)-butiril]-indol-2-karbonsav NMR-spektruma (CDC13): 6 2,08 (2 H, m), 2,38 (2 H, m). 2,96 (2H, t, J = 7 Hz) 3,60 (3 H, s) 7,3 (4 H, m), 7,92 (1 h, d, J = = 10 Hz).

Az így előállított észter 7,4 g mennyiségét (26 mmól) 50 ml etanolban 1 atmoszféra nyomáson 0,5 g platina-oxid jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátból átkristályosítjuk. A kapott l-[4-(metoxi-karbonil)-butiril]-indolin-2-karbonsav 141-142°-on olvad. NMR (CDClj): 5 1,88 (2 H, m), 2,45 (4H, m), 3,27 (2 H. m), 3,65 (3 H, s), 5,17 (1 H, m), 7,78 (3 H, m), 8,22 (2 H, m, J = 9 Hz).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

12