185080. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indol-dihidroindol szerkezetű alkaloid származékok előállítására
1 2 THF-t adunk a rekadóelegyhez, majd körülbelül 0 °C-on kénhidrogént buborékoltatunk rajta keresztül 20 percen át. Ezután a reakdóelegyet további 30 perág szobahőmérsékleten keverjük. A reakdóelegyhez 4 ml 50%-os vizes ammóniumhidroxid oldatot adunk (ezt 2mlvízés21mll4n vizes ammónium-hidroxid oldat keverésével állítjuk elő- és 1,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután további 10 ml 50%-os vizes ammónium-hidroxid oldatot és 15 ml etil-acetátot adunk a reakeóelegyhez. A keveréket választótölcsérben összerázzuk, majd celiten megszűrjük. A celitet többször híg ammónium-hidroxiddal, majd éterrel mossuk. A reakdóelegyet ezután a mosófolyadékokkal egyesítjük és választótölcsérben az etilacetátos fázist elválasztjuk. A vizes fázist négyszer vele azonos térfogatú etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extraktumokat egyesítjük, híg ammónium-hidroxid oldattal, majd telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk. Az etilacctát vákuumban történő elpárologtatása után a maradékot toluollal képzett aezotrop segítségével szárítjuk, termelés=85,2 mg izomerdiol-keverék (Z jelentése V és VI képletű csoport). A keveréket 8 g szilídumdioxidon végzett kromatográfiával tisztítjuk. Az eluens 20:1:1 éter-toluol-dietilamin • keverék, amihez növekvő mennyiségű metanolt adagolunk. Először 50 ml 6%, majd 50 ml 9%, 50 ml 13%, 50 ml 20% metanol-tartalmú eluenssel végezzük a kromatográfiás elválasztást. A vékonyrétegkromatográfiás vizsglatok szerint valamelyik fenti izomert tartalmazó frakciókat külön-külön összegyűjtjük, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. 19,4 mg 4-dezacetil-20’-S-hidroxi-vinblasztint (lia általános képlet, ahol Z jelentése V képletű gyök és 23,5 mg 4-deacetil-20’-R-hidroxi-leurozidint (Ila általános képlet, ahol Z jelentése VI képletű gyök) kapunk. A 2. izomerből kapott 4-deacetil-20 -S-hidroxi-vinblasztin fizikai jellemzői az alábbiak: Tömegspektrum: m/e 798 (transzmetilezés), 784, 750, 725, 667, 587, 559, 427, 339, 311, 240, 205, 169,119, tér deszorpdó 784. nmr spektrum (CDCh) 0,91, 1,07, 2,71,3,55, 3,73, 3,80, 4,05, 5,78, 6,0776,44, 6,59, 7,98 ő. > A 2. izomerből kapott 4-dezacetil-20’-R-hidroxi-leurozidin fizikai jellemzői az alábbiak: Tömegspektrum: m/e 798 (transzmetilezés), 784, 740, 726, 681, 667, 587, 560, 427, 371,240, 170, 135,122,107, tér deszorpdó 784. Ugyanezt a reakciót elvégeztük a 4’,20’-anhidro4- -dezacetil-vinblasztin (1. izomer) kiindulási anyag esetében is, amelyben diasztereomer keverék-keletkezett, ahol Z jelentése III, illetve IV képletű gyök. Az i/.omerkeveréket izoláltuk, majd az izomereket a leírt módon elválasztottuk egymástól. A kapott vegyületek fizikai jellemzői az alábbiak: 4-dezacetil-20’-R-hidroxi-vinblasztin (a 2’,20’-anhidro-dezacetil-vinblasztin 1. izomerből kiindulva): tömegspektrum: m/e 798 (transzmetilezés), 784, 753, 725, 667, 587, 427, 369, 355, 328, 295, 170, 154, 141, térdeszorpdó 784. lndravörös spektrum (CHCHo): 3670 , 3550 , 3490, 1720, 1650 (gyenge), 1610, 1495, 1455, 1425 cm'1. 4-dezacetiI-20 -S-hidroxi-leurozidin (4’,20’-anhidro-vinblasztin 1. izomerből kiindulva): tömegspektrum: m/e 812, 798 (mindkettő transzmetilezés), 784,754, 740, 726, 681, 667, 623, 687, 570, 427, 393, 371, 329, 240, 170, 149, 135, 111, 107, térdeszorpdó: 784. 2. példa 4-dezacetil-20’-R-hidroxi-vinblasztint etanolban oldunk és az oldahoz 2%-os kénsavas etanolt csepegtetünk, míg a pH 4,0 értékre csökken. A savas etanolos oldatot szárazra párolva 46,3 mg 4-dezacetil-20’-R-lüdroxi-vinblasztin-szulfátot kapunk, melynek tömegspektruma a következő: m/e (térdeszorpdó): 845,808,785,784,770,753 és 738. A talámány szerinti eljárással előállított vegyületek mitotikus inhibitor hatásúak, szövetkultúrában fenntartott kínai .aranyhörcsög petefészek sejt-tenyészeten Siminoff-AppŰed Microbiology, 9, 66-72 (1961) - módszerét használva metafázisú fejlődés megállást okoznak.^ fenti eljárás alkalmazása esetén a 4 -dezacetil-20 -R-hidroxi-vinblasztin (a 4’,20’-anhidro-4-dezacetil-vinblasztin 1. izomerből kiindulva) ++ inhibidót eredményezett 2 mcg/ml, a 4-dezacetil-20 -S-hidroxi-vinblasztin (4 ’ ,20 ’-anhidro-4-dezacetii-vinblasztin 2. izomerből kündulva) és a 4 -dezacetil-20-S-hidroxi-leurozidín (4’,20’-anhidro4-dezacetil-vinblasztin 1. izomerből kiindulva) ♦ inhibidót eredményezett 2 mcg/ml dózis esetén. A vinblasztin ++ inhibidót eredményezett 0,01 mcg/ml dózis esetén. A találmány szerinti eljárással előállított indoldihidroindol szerkezetű vegyületek mitozis inhibitor hatásúak és potendálisan alkalmasak emlősök rákos megbetegedésének kezelésére. Mint ilyeneket a vinblasztinhoz és vinkrisztinhez hasonlóan előnyösen intravénásán adagolhatjuk és legalább is kezdetben, ugyanazon rákos megbetegedések ellen alkalmazhatjuk, mint a vinkrisztint és vinblasztint. A készítmények formálásához egy vagy több gyógyszerészetileg megfelelő hordozó anyagot vagy oldószert alkalmazunk. A találmány eljárása foganatosítása szerint előnyösen izotóniás oldatokat alkalmaznak, amely 1-10 mg/1 koncentrációban tartalmazza a Ha általános képletű indoldihidroindol-amid sóját. A készítmény 0,01-1 mg/kg emlős testsúly dózisban hetenként egyszer vagy kétszer vagy kéthetenként adagolhatjuk a hatóanyag aktivitásától és toxicitásától függően. Alternatív módszer a terápiás dózis testfelület alapján történő megállapítása, ebben az esetben 0,0-10 mg/m2 emlős testfelület dózist alkalmazunk. 7. vagy 14.napon. Ezen túlmenően a vegyületek közbenső termékek és például adlezhetők és 4,20’-diadl-származék készíthető belőlük vagy oxidálhatok. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a Ha általános képletű - ahol Z III, IV, V vagy VI képletű izomercsoportot jelent — vegyületek vagy ezek gyógyszerészetileg elfogadható savaddidós sóinak előállítására, azzal jellemezve , hogy valamely Ha általános képletű indol-dihidroindol származékot, ahol Z jelentése VII vagy VIII képletű csoport, 4:1 és 3:1 közötti arányú tetrahidro-furán-víz elegyben ozmium-tetroxiddal reagáltatunk, és kívánt esetben vagy keletkezett szabad bázist gyógyszerészetileg elfogadható savaddidós sójává alakítunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan Ha általános képletű indol-dihidroindol származékok előállítására, ahol Z Hl vagy IV képletű csoportot jelent, előállítására, azzal jellemezve, hogy olyan 185.080 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
