185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 185.021 I. Táblázat A 30912 komponens Ráérték A B C D E F 0,35 0,45 0,54 0,59 0,27 0,18 G 0,13 Az A-30912 A, B, C, D és H komponensek különböző oldószerekkel szilikagélen (Merck-Darmstadt szllikagél No. 60, 20 x 20 cm) Candida albicans mikroorganizmussal kivitelezett bioautográfiával kapott Rjértékeit a II. táblázatban adjuk meg. H. Táblázat A 30912 komponens Rpértékek oldószer-elegy á b e d A komponens “ Ö^F Ó,l4 o,lB. 0,43 B komponens 0,39 0,21 0,42 0,47 C komponens 0,46 0,31 0,51 0,58 D komponens 0,50 0,38 0,57 0,61 H komponens 0,42 0,27 0,36 0,53 Oldószer-elegyek a: etíl-acetát és metanol 3:2 arányú elegye , b: etil-acetát és metanol 7:3 arányú elegye c: acetonitril és víz 95:5 arányú elegye d: etil-acetát, etanol és ecetsav 40:60:0,25 arányú elegye. Az A-30912 A, B, D és H komponenseket azonosíthatjuk nagy felbontású, alacsony nyomású folyadékkromatográfiával is, az alábbi feltételek mellett: oszlop: üveg, 0,8 x 15,0 cm töltés: Nucleosil110-CJS (Mechery-Nagel and Company), a feltöltést a későbbiekben ismertetettek szerint végezzük oldószer: metanol, víz és acetonitril 7:2:1 arányú elegye minta térfogat: 8 ß minta súlya: 8 pg oszlop hőmérséklete: szobahőmérséklet áramlási sebesség: 18, ml/perc nyomás: 9,8 atm detektor: UV-detektálás 222 nm-en (ISCO Model 1800, változtatható hullámhosszúság, UV-érzékelő monitor) pumpa: LDC Duplex Minipump injektálás: tűinjekció. A 111. táblázatban megadjuk az A-30912 A, B, D és H komponensek retendós idejét. III. táblázat A 30912 komponens Retenciós idő másodpercekben A 792 B 870 H 990 D 1140 15 Az enzim előállítása 1. A termelő mikroorganizmus A találmány szerinti antibiotikumok dezacilezéséhez használt enzimet az Áctinolanaceae családba tartozó bizonyos mikroorganizmusok, előnyösen az Actínoplanes utahensis NRRL 12052 törzs termeli. 2‘J Az enzim hasonló lehet a penicillinek dezacilezéséhez használttal, ezt a munkát Kleinschmidt, Wright, Kvanagh és Stark írja le a 3.150.059. számú amerikai szabadalmi leírásban. Bár az 1. példában ismertetjük az A. utahensis NRRL 12052 törzs tenyésztésének „c előnyös módszerét, a szakember számára nyilvánvalóan más módszerek is lehetségesek. Az Açtinoplanaceae viszonylag új családja az Actinomycetales rendnek, Első esetben Couçh írja le 1955-ben ezt a családot (J. Elisha-Mitchell, Sel. Soc. 71, 148, 1955). A család és egyes nemek jellenj- 30 zőit az alábbi irodalomban találjuk meg: Bergey s Manual of Determinative Bacteriology, 8th ed., R.E. Ruchanan and N. Ë. Gibbons, Eds., Th Williams Wilkins Co., Baltimore, Md., 1974, 706-723. oldal. Mindezideig Í0 nemet különböztetnek nieg: I. Actínoplanes (a típusnem, és mindeddig a leg- 35 gyakrabban előforduló, II. Spírílíospora, Ilii. Streptosporangium, IV. Amorphosporanguni, V. Ampulládéba, VI. Pilimelia, VII. Planomonospora, VIII. Planobispora, IX. Datylosporangium és X. Kitasatoa. Egy izolált és jellemzett fajok és változatok pél- 40 dául az alábbiak: Actínoplanes philippinensis, Actínoplanes armen iacus, Actínoplanes utahensis és Actínoplanes missuríensis, Spirillospora albida, Streptosporiangium roseum, Streptosporangium vulgare, Streptosporangium roseum var. Hollandénsis, Streptospirangium album, Streptosporangium viridiaibum, Amorphosporangiurn auranticolor, Ampullariella reguláris, Ampullariella campanulata, Ampullariella lobata, Ampullariella digitata, Pilimelia terevasa, Pilimelia anulata, Planomonospora parontospora, Planomonospora venezuelensis, Planobispora longis- 5Q pora, Planomospora rose, Dactylosporangium aurantiacum és Dactylosporangium thailandense. A találmány szerinti eljárás során használt enzim előnyös forrása az Actínoplanes nem. Az Actinoplanes nemen belül az Actinoplanes utahensis faj különösen előnyösen használható. 55 A találmány szerinti eljárásban alkalmazott fajok tenyészeteit a Northern Regional Research Laboratory törzsgyűjteményéből megrendelhetjük az alábbi kódszám alatt: Actinoplanes utahensis NRRL 12052 Actinoplanes missouriensis ■ NRRL 12053 6
