185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 tatjuk. Ügyeljünk arra, hogy a keverő ne élje el a gömblomik alját. Ez megakadályozza a szilikagél részecskék összeállítását. Hűlni hagyjuk a szuszepnziót. Ezután összegyűjtjük a szililezett szilíkagélt, 3 l toluollal, majd 3 lacetonnal mossuk, és 16-20 órán át levegőn szárítjuk. 3,5 1 acetonitril és víz 1:1 arányú elegyében szuszpendáljuk a száraz szilíkagélt, szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, szüljük, 3 1 acetonnal mossuk, majd levegőn egy éjszakán át szárítjuk. 3. lépés: a második szililezés Az első szililezés ismertetésekor megadott eljárást ismételjük meg 200 ml oxadecil-triklór-szilánnal. A szuszpenziót 2 órán át 60 °C hőmérsékleten visszacsepegő hűtő alatt melegítjük, miközben óvatosan keverjük. A végterméket szűréssel elkülönítjük, 3 1 toluollal, majd 6 1 metanollal mossuk, 50 °C hőmérsékleten 16—20 órán át csökkentett nyomsú térben szárítjuk. 11. példa A Meichel-Miller oszlopok szuszpenzióval való megtöltése Általános információk A. Az analitikai vagy preparatív oszlopokat tölthetjük meg az alábbi eljárással. B. Szilíkagélt vagy szilikagél reverz fázisú töltőanyagot használunk (például Quantum LP-1,10-20;/ részecskenagyság, LiChroprep RP-8 és RP-18, részecskengyaság 25-40 p). Használhatunk azonban más szilikagéleket is, például Shandons ODS Hypersil, részecskenagyság 5 p, de másokat is. ' C. A szuszpenzióval való feltöltést általában 0,8 atmoszféránál kisebb nyomáson, és 5 ml és 40 ml/ perc közötti folyadékáramlás mellett végezzük, az áramlási sebesség az oszlop nagyságától függ. A feltöltés közben alkalmazott nyomásnak meg kell haladnia a tényleges elkülönítés alatt alkalmazott nyomást, a többletnyomás 0,1-0,2 atm kell, hogy legyen. A többletnyomással elérjük, hogy a kromatográfia alatt az adszorbens nem tömörödik tovább. D. A nyomásban létrejövő gyors csökkenés töréseket vagy csatornákat alakíthat ki a töltőanyagban, ez nagymértékben csökkenti az oszlop hatékonyságát. Ezért fontos, hogy a nyomást lassan csökkentsük 0- ra, még akkor is, ha a pumpát kikapcsoljuk. E. A megfelelő nagyságú oszlopok a következők: (Ace Glass Cat. No., nem töltött), No. 5795-04, 12 ml. No. 5795-10, 110 ml, No. 5796-16, 300 ml, No. 5795-24,635 ml, és nO. 5796-34,34 ml. D. Az üvegoszlop megöltéséhez szükséges idő percektől több óráig terjedhet attól függően, hogy milyen nagyságú oszloppal dolgozunk és, hogy a kutatónak milyen gyakorlata van. Az alábbi lépésekből áll az oszlop feltöltése: 1. Az üvegoszlopot egy rezervoár oszlophoz kapcsoljuk, az utóbbi oszloptérfogata kétszerese az előzőnek. Mindkét oszlopot függőleges állásba állítjuk, a rezervoár oszlopot felülre. 2. Kimérjük a töltőanyagot (200 ml-es oszlophoz kb. 100 g). 3. Körülbelül ötszörös térfogatú oldószert adunk a töltőanyaghoz, az oldószerként 70-80% metanolt és 20-30% vizet használunk. 4. Addig rázzuk a szuszpenziót, míg a részecskék átnedvesednek, ezután egy éjszakán át vagy tovább hagyjuk állni, a részecskék tökéletes átitadódására. Ezután a felülúszót dekantáljuk. 5. A gyantát megfelelő oldószerben szuszpendáljuk a rezervoár oszlop feltöltésekor. A rezervoárt feltöltjük, de előtte részben oldószerrel töltjük meg. Nagyobb mennyiségű szuszpenzió használatakor jobb eredményeket kaphatunk, ugyanakkor, ebben az esetben nagyobb rezervoár tartályt, vagy többlépéses feltöltést kell alkalmaznunk. 6. Teflon dugóval lezárjuk a rezervoár tartályt (lásd a 4.131.547. számú amerikai szabadalmi leírás 1. ábráján a 3. pontot), összekötjük a pumpával, majd abban az esetben, ha Ace 13265-25 katalógusszámú pumpát vagy hasonló, oldószer-továbbító rendszert használunk, azonnal megindítjuk az oldószer áramlását, mégpedig maximális sebességggel (kb. 20 ml/p perc). 7. Addig folytatjuk az áramoltatást, míg az oszlop teljesen fel nem töltődik az adszorbenssel. A feltöltés közbeni nyomásnak nem szabad változnia a művelet alatt (kb. 0,8 atm a nagyobb oszlopok esetén, és 1,2 atm az analitikai oszlopok esetén. A legtöbb esetben a 0,8 atm-ánál kisebb nyomás elegendő). 8. A nyomás maximális értékét elérve redukáljuk az áramlási sebességet, akkor a nyomás csökken. 9. Amikor az oszlop feltöltődött az adszrobenssel, kikapcsoljuk a pumpát. A nyomást 0-ra hagyjuk esni, lekapcsoljuk a rezervoár tartályt, ezt előoszloppal helyettesítjük. Az előoszlopot oldószerrel és kevés adszorbenssel töltjük fel, és maximális nyomáson tartjuk, míg az oszlop tökéletesen feitöltődik. További információk érdekében tanulmányozzuk az általános bemutatást. A nyomást minden esetben lassan kell csökkenteni a pumpa kikapcsolását követően, ily módon elkerüljük a töltőanyag törését vagy benne csatornák kialakulását. 10. Csökkentjük a nyomást, és óvatosan lekapcsoljuk az oszlopról az előoszlopot. Spatulával 2—4 mm töltőanyagot eltávolítunk az oszlop tetejéről, és egy vagy két szűrőt helyezünk az oszlopra. A töltőanyag tetejét enyhén megnyomkodjuk, és teflon dugót helyezünk a tetejére. Hozzákapcsoljuk a pumpát az oszlophoz, nyomást biztosítunk, ami általában kevesebb, mint 0,8 atm, miközben az oszlop üvegfalán át megfigyeljük, hogy további gyanta kerül-e az oszlop tetejére. Ha további töltőanyag kerül az oszlopra — ez nagyobb oszlopok használatakor előfordul —, úgy ún. halott terek vagy csatonák keletkeznek. Ebben az esetben a 9. lépést meg kell ismételnünk. 12. példa A tetrahidro-A-30912 A előállítása Az A-30912 A komponenst etanolban oldjuk. Abszolút etanolban platina-oxidot redukálunk platina előállítására, amit az A-30912 A komponens katalitikus redukálásra használunk hidrogénnel és pozitív nyomás alatt. A reakciót 2-3 órán át végezzük, ezalatt teljessé válik. Szűrjük a reakcióele gyet, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot kevés tercier-butanolban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, amiután tetrahidro-A-30912 A-t kapunk. 13. példa A tetrahidro-A-30912 B előállítása Az A-30912 B komponenst etanolban oldjuk. Abszolút etanolban platina-oxidot redukálunk platina előállítására, amit az A-30912 B komponens katalitikus redukálásra használunk hidrogénnel és pozitív 185.021 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
