184991. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin C antibiotikum előállítására új micromonospóra törzzsel
184991 Találmányunk tárgya eljárás gentamicin C antibiotikum előállítására mikrobiológiai úton, Micromonospora purpurea mikroorganizmus fajhoz tartozó törzzsel, aerob fermentációval, asszimilálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon, oly módon, hogy az alkalmazott mikroorganizmus a Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO törzse (MNG 00210), vagy mutagén behatás után szelektív táptalajon kiválasztott utódai, előnyösen a KGO—35 törzs (MNG 00209), majd a keletkezett antibiotikumot a fermentléből ismert módon elkülönítjük. Ismeretes, hogy a gentamicinek, különösen a gentamicin C, széles antibakteriális spektrummal és viszonylag csekély toxicitással rendelkező antibiotikumok. Gentamicin C alatt a gentamicin Cj, a gentamicin C2, a gentamicin C2a, valamint a gentamicin Cla meghatározott arányú elegyét értjük. E komponensek egymáshoz viszonyított arányát az Amerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyvének XX. kiadása szabja meg. Ismeretes továbbá, hogy a gentamicin antibiotikumokat Micromonospora fajokkal állítják elő. A 3 091 572 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a Micromonospora purpurea NRRL—2953 (=ATCC 15835), a Micromonospora echinospora NRRL—2985 (=ATCC 15837), a Micromonospora echinospora ssp. ferruginea NRRL—2995 (=ATCC 15836), a Micromonospora echinospora ssp. pallida NRRL—2996 törzsekkel termelik a gentamicin C-t. A fermentlének viszonylag alacsony gentamicin C koncentrációja miatt az antibiotikum kinyerése csak bonyolult és veszteséges módszerekkel lehetséges. Ugyancsak gentamicin C antibiotikumot termelnek a Micrompnospora purpurea varietas violacea 55—5829 (772 781 sz. belga szabadalmi leírás) és a Micromonospora purpurea varietas nigrescens MNG 00122 (168 778 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás) törzsek. Ezek a Micromonospora törzsek a gentamicin C-t viszonylag alacsony koncentrációban termelik, a fermentlében a gentamicin C tartalom kisebb, mint 1000 E/ml. Az alacsony gentamicin C koncentráció miatt a kinyerés bonyolult, így üzemileg nehezen megvalósítható az eljárás. A gentamicin C termelésének fokozásával foglalkozik a 3 136 704 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, de az eredmény ugyancsak alacsony hatóanyag tartalmú, a fermentlé gentamicin C tartalma csak mintegy 400 E/ml. Az eljárás hátránya még, hogy a kapott termék tisztasága nem elegendő. A gentamicin antibiotikumokat termelő törzsek termelőképességének fokozását tűzte ki célul a 174 695 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás, mely szerint a Micromonospora törzsek termelőképessége speciális táptalajon való tenyésztés révén jelentősen megnő, a fermentlé összes gentamicin antibiotikum tartalma 1200—1600 E/ml. A speciális táptalajokon való tenyésztés azonban — mely a termelőképesség növekedését eredményezi — bonyolultabbá és ezért költségesebbé teszi az előállítási eljárást. Célul tűztük ki egy olyan eljárás kidolgozását, mely az előzőeknél nagyobb koncentrációban, nagyobb tisztasági fokkal és kevésbé bonyolult módon állít elő gentamicin C antibiotikumot. Találmányunk szerint a gentamicin C antibiotikum előállítására új Micromonospora törzset izoláltunk, majd mutagén behatás után szelektív táptalajon utódait kiválasztottuk és ezekkel az új törzsekkel a gentamicin C-t nagyobb koncentrációban, nagyobb tisztasági fokkal egyszerűbb módszerekkel állítjuk elő, mint a korábbi eljárásokkal. A találmányunk szerinti eljárásnak a gentamicin C antibiotikumot termelő új Micromonospora törzse mor- 5 fológiailag Micromonospora purpurea Fajhoz tartozik. Részletes rendszertani vizsgálattal megállapítottuk, hogy az új törzs több rendszertani bélyeg alapján elkülöníthető az autentikus Micromonospora purpurea fajtól, új alfajnak minősül, és a Micromonospora purpurea ssp. 1Ö luridus nevet kapta. Az új törzsünket, a Micromonospora purpurea ssp. luridus KGO jelű törzset MNG 00210 szám alatt letétbe helyeztük az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében, 1981. október 15-én. Összehasonlítva 15 a gentamicin C antibiotikumot termelő egyéb Micromonospora törzsekkel, az új törzs tulajdonságait a következőkben jellemezzük : Mikromorfológiai tulajdonságok : 20 25 30 35 40 45 50 KGO A jól fejlett, hosszú fonalakból felépülő (MNG 00210) micélium, felszínén olykor spórák figyelhetők meg egyesével, a spórák legtöbbször sporofórok (spóratartó hifa-fonalak) végén ülnek. A spórák felszíne sima. ATCC 15835 ATCC 15836 ATCC 15837 MNG 00122 Micromonospora purpurea varietas violacea Jól fejlett, elágazó fonalakból álló micélium, gyér spóraképződés, spórákat ha találunk, azok általában sporafórok végén figyelhetők meg. A spórák felszíne sima. A sűrű, tömött micéliumszövedéken spórákat nagyon nehezen figyelhetünk meg ; e törzset igen gyér spóraképződés jellemzi. A spórák felszíne érdes. A jól fejlett, elágazó fonalakból felépülő micéliumon igen intenzív spóraképzés figyelhető meg. Mivel a spórák igen gyorsan megérnek és ilyenkor a sporofórokról leválnak, a spóratartó hifafonalhoz viszonyított pontos helyzetüket nehéz megállapítani. A spórák felszíne érdes. Hosszú, sűrűn elágazó fonalak, spórák nagyon ritkán láthatók. A spórák sima falúak, 1,0—1,3 u átmérőjűek. Fiatal fonalakon egysejtű ovális spórák képződnek, 1,0 g átmérőjűek. Finom, bazofil fonalak, csillagszerű elhelyezkedéssel. Makromorfológiai tulajdonságok : A vizsgálatokban használt táptalajok összetétele Waksman alapján (S. Waksman : The Antinomycetales I—IL, Williams-Wilkins, Baltimore, 1961) a következő 55 volt : 1. Czapek-szacharóz agar szacharóz 30 g nátriumnitrát 3 g 60 dikáliumhidrogénfoszfát 1 g káliumklorid kristályos magnéziumszulfát 0,5 g (MgS04.7(H20) kristályos vas(II)szulfát 0,5 g 65 (FeSÖ4.7 H2ö) 0,01 g 3
