184896. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 3-alfa-amino-szubsztituált szteroid származékok előállítására
15 184896 19. példa ((20S)-3a-[(2-hidroxi-etil)-amino]-5a-pregnán-20-ol-hidroklorid 7 g (20S)-3a-amino-5a-pregnán-20-olt és 7 nátrium-karbonátot 100 cm3 vízmentes dioxánnal szuszpendá- Iunk és 6,6 cm3 2-(2-bróm-etoxi)-tetrahidropiránt adunk hozzá. Az elegyet 24 óráig inert atmoszférában visszafolyató hűtő alatt melegítjük. Ezután lehűtjük szobahőmérsékletre, vízzel hígítjuk, éterrel extraháljuk, szárítjuk, csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és szilícium-dioxidon oszlopkromatografálással tisztítjuk. Eluálószerként kloroform : metanol és ecetsav 85: 5: 10 arányú elcgyét használjuk. 7,7 g sárga olajat kapunk. A védőcsoport hidrolízise 3 g fent kapott terméket feloldunk 30 cm3 etanolban és 15 cm3 2 n sósavban és az elegyet visszafolyató hűtő alatt másfél óráig melegítjük, majd lehűtjük ; 100 cm3 nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldatába öntjük, 15 percig hűtjük, izoláljuk, vízzel mossuk, 40 CJ-on csökkentett nyomáson szárítjuk, majd feloldjuk 350 cm3 10% metanolt tartalmazó metilén-kloridban. Az elegyet leszűrjük, kb. 50 cm3 térfogatra bepároljuk, 100 cm3 etilacetátot adunk hozzá és az egészet a felére töményítjük. A csapadékot elkülönítjük. A csapadékot feloldjuk 100 cm3 metanolban, az oldatot leszűrjük és 30 cm3-re koncentráljuk. 70 cm3 etilacetátot adunk hozzá, majd az egészet a felére töményítjük, izoláljuk, 40 C°-on csökkentett nyomáson szárítjuk és a kívánt terméket bázis formájában kapjuk 1,65 g mennyiségben. Op. : 215 C°. Hidroklorid előállítása A fenti bázisból 1,5 g-ot feloldunk 40 cm3 metanolban és 1,6 n sósavas etilacetát-oldatot adunk hozzá, míg savanyú pH-t nem kapunk, majd 60 cm3 etilacetát hozzáadása után az elegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, elkülönítjük, 40 C°-on csökkentett nyomáson szárítjuk. 1,5 g kívánt terméket kapunk, amely 260 C° felett olvad. 20. példa a-dimetilamino-N-[(20S)-20-hidroxi-5«-pregnán-3oc-il]-acetamid Az 1. példa A) lépése szerint járunk el és 2,552 g (20S)-3a-amino-5oc-pregnán-20-olt és 3,350 g N,N-dimetil-glicin-hidokloridot használunk. A kívánt származékot és az O.N-diszubsztituált származékot tartalmazó 4 g nyersterméket kapunk. Nátrium-hidroxiddal metanolban elszappanosítva a kívánt termék keletkezik. Op.: 206 C°. [<x]D = + 29° ± 1° (c=l% CHC13). 21. példa Tablettákat állítunk elő, melyeknek hatóanyaga : (2S)-2-amino-N-[(20S)-20-hidroxi-5a-pregnán-3«-il]-propionamid-hidroklorid 20 mg segédanyag 1 tablettában 100 mg-ig. (A segédanyag összetétele: laktóz, keményítő, talkum magnézium-sztearát.) 16 22. példa Az alábbi hatóanyagú tablettát állítjuk elő: 2-amino N-[(20S)-hidroxi-5z-pregnán-3a-iI]-N-metil-acetamid-hidroklorid 15 mg segédanyag 1 tablettához 100 mg-ig kiegészítve. (Segédanyag összetétele : laktóz, keményítő, talkum, magnézium-sztearát.) Farmakológiái vizsgálat 1. Anafilaxiás sokk-adjuváns Elv: Az állatoknak olyan terméket adagolunk, amely az immí n-rendszer aktivitását képes stimulálni és ezt a hatást annak az antigén adagolására előidézett reakcióra fellépő sokk fokozódásával fejezzük ki, melyre az állatot szenzitizáltuk. 30—35 g súlyú hímegereket marhaszérum-albuminnal szenzitizáltunk intra-plantáris úton. 8 nap múlva az állatok intravénás úton kapják ugyanezt az antigént. A minimális szenzitizálási feltételek mellett a kontrollállatok az utosó adagolás idejekor nem szenvednek halálos sokkot. A tes/telendő terméket intra-plantárisan injektáltuk, antigénnel kevertük: ha ez a termék adjuváns, akkor a szenziti/álást növeli és az intravénás adagolással történő adagoláskor ennek eredménye halálos sokk lesz. Aktív dózisnak tekintjük, azt a dózist, amely 50%-ban vagy ennél nagyobb százalékban okoz mortalitást az állatoknál. Eredmények : Példaszám Dózis/állat mg-ban í. 0,5 2. Sí 4. 5 5. 5 6. 2 7. 1 8. 5 9. 1 10. 0,5 13. 5 14. 0,5 2. Rozetta-teszt bárány-vörösvértestekkel Elv: Az állatoknak az immún-rendszer aktivitását stimuláíó terméket adagolunk és a hatást az immunogén termék injektálásával kiváltott reakció kapacitás-növekedésében fejezzük ki. Hímnemű 3 hónapos patkányokat bárány-eritroci iákkal szenzitizálunk intra-peritoneális úton (0. nap). 7 nappal később (7. nap) az állatok lépét eltávolítottuk és a lépsejteket érintkeztettük a bárányok eritrocitáival : ezután kiszámítottuk a leukociták százalékos értékét, melyek körül az eritrociták rozettákat képeztek. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
