184720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-lipotropin hormon fragmens peptid származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 H-D-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,18, H-Leu-GIu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,22. Az Rr-eket BujPy :Ac:Wa (2:3/4;l/4:l ) oldószer-rendszerben SiOj-on határozzuk meg. 18. példa A dezamino-Ser-OH-t vagy 2,3-dihidroxi-propionsavat kondenzáljuk H-Glu(OtBu)-Lys-(Boc)-Ser-Gln-Ttir-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu védett pepiiddel a 9. példában leírtak szerint, a keletkező pepetidet TFA- val kezeljük az 5. példa 3. pontja szerint, és az alábbi peptideket nyeljük: Dezamino-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Pro-Leu-OH, Rf = 0,28, 2,3-dihidroxi-propanoil-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,22. Rf meghatározása BuPy:Ac:Wa (2:3/4:l/4:l) oldószer-rendszerben történik. 19. példa A 9. példában ismertetett módszer szerint H-Thr-Sor Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu-t az 5. példa 3. pontjában leírt módszer szerint előállított intermedier pepiidet, vagy 2-hidroxi4-metiltio-butánsavval, vagy 2-hidi;oxi-4-metil-pentánsawal kapcsoljuk. Az 1. példában leírtak szerint a keletkező pepiidet TFA-val kezeljük — a védőcsoport eltávolítása céljából -, majd ioncserélővel kezeljük, és az alábbi peptideket kapjuk: 2-hidroxi4-metiltio-butanoil-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,16, 2-hdiroxi4-metil-pentanoil-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,28. Hasonló módszerrel a 10. példában intermedierként nyert H-Ser Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Vai-Thr-Leu-Otbl) fragmenset 2,3-dihidroxi-butánsavval kapcsoljuk. A keletkező pepiid védőcsoportjának eltávolítása után az alábbi pepiidet nyerjük: 2,3 -dihidroxi-b utanoil-Ser -Glu-Lys-Ser-Gln -Thr-Pro Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf = 0,25. Az Rf értékeket BuJPy:Ac:Wa (2:3/4:l/4:l) oldószer-rendszerben, Si02 -on határoztuk meg. 20. példa DMF-ben lévő 0,36 mmól H-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu (5. példa 3. pont) pepiidhez 0,066 g p-nitrofenil-acetátot adunk. Az elegyet egy éjszakán át állni hagyjuk, majd további mól ekvivalensnyi (0,066 g) p-nitrofenil-acctátot adunk hozzá. Az elegyet egy napig keverjük, majd az oldószert lepároljuk. A maradékot DMF és MeOH 1:2 arányú keverékében feloldjuk és ezt követően négyszeres mennyiségű etil-acetátot adunk az elegyhez. A keletkező csapadékot kiszűrjük, és vízzel mossuk. A védett N-acetil-származék olvadáspontja 210 “c. Rf (CllCl3:Cl!3OH:Wa/70:30:5) = 0,75 SiOj -on. hímek a védett peptidnek a védő csoportját az előzőekben ismertetett módszerrel eltávolítjuk TFA és anizol segítségével, majd acetát formában levő ioncserélővel kezeljük. A pepiidet Bu:Ac:Wa/4:l :5 oldószer-rendszerben végzett ellenáramú megoszlással tovább tisztítjuk, és végül a terméket liofilezzük: Ac-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH-acetátsó Rf (BuPy:Ac:Wa [2:3/4:l/4:1 ]) = = 0,29 SiOj-on. 21. példa 673 mg Boc-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc) Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-OH-t és 101 mg HOBt-ét (1,5 ekvivalens) oldunk 10 ml DMF-ben és az oldatot —20 °C-ra hütjük. 193 mg H-Thr-ajJ-dehidroleucin-terc.-hutil-észter-p-toluolszulfonáttal (Tét. Letters 3609, 1975) keverjük, és 0,063 ml N-etilmorfolint adunk az elegyhez, majd 113 mg (1,1 mól ekvivalensnyi mennyiség) DCCI-t mérünk hozzá. - 20°C-on 15 percig és szobahőmérsékleten 22 óráig végzett keverés után a kicsapódott DCHU-t szűréssel elkülönítjük. A szűrletet pároljuk, és etil-acetátot adunk hozzá. Hűtés után a kiváló csapadékot kiszűrjük, etil-acetáttal és éterrel mossuk, majd szárítjuk. A 12-tagú védett pepiidet TFA-val kezeljük, és a keletkező nyers terméket a fentiekben leírt módszer alapján tisztítjuk. Az alábbi pepiidet kapjuk: H-Ther-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-a-jTdehidro-Len-OH-acetátsó. Kitermelés: 245 mg. Rf (BuPyiAc.Wa [2:3/4 1/4:1 ]> = 0,16 Si02-on. A fenti eljárással állítjuk elő a következő pepiidet acetátsó formájában: H-Trh-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-2-hidroxi4 -metil-pentánsav. Rf = 0,18 (azonos oldószer-rendszerben). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás A-R-L-Ser-R^L-Thr-L-Pro-L-Leu-L-Val- L-Thr-B (I) általános képletű peptidszármazékok - a képletben R jelentése L-Lys-aminosav-maradék, Rt jelentése L-Glu vagy L-Gln aminosav-maradék, ha B jelentése L-Leu-OH, akkor A jelentése hidrogénatom, H-L-Glu, ZfL-GIu, ahol Z, jelentése H-L-Ser, H-D-Ser, H-L-Leu, dezamino-Ser, 2,3-dihidroxi-propanoil, Z2-L-Ser-L-Glu, ahol Z2 jelentése H-L-Thr- H-D-Thr, dezamino-Thr, vagy 2,3-dihidroxi-butanoil, H-Qt L-Thr-L-Ser-L-Glu, ahol Qj jelentése L-Met, L-Met(O), L-Met(02 ), L-Leu, Q2-L-Thr-L-Ser-L-Glu, aliol Q2 jelentése. H-D-Met, (3-Ala, H-D-Met(O), H-D-Met(02), dezanűno-Met, dezamino-Met(02). dczamino-Met(O), 6-amino-hexanoil, 2 '’idroxi4-metil-pentanoil, 2-hidroxi4-metiltio-butanoil, Z3-Q't-L-Thr-L-Ser-L-Glu, ahol Z3 jelentése H-L-Phe, dezamino-Phe, H-L-Leu-L-Phe, H-D-Phe, H-Gly-L-Phe, H-L-Ala-L-Phe, és Q't jelentése L-Met, L-Met(O), L-Met(02), és ha B jelentése D-Leu-OH, akkor A jelentése hidrogénatom H-L-Ala-L-Phe-L-Met-L-Thr-L-Ser-L-Glu, H-L-Thr-L-Ser-L-Glu, Hq",-L-Thr-L-Ser-LGlu, aliol Q"x jelentése L-Met, dezamino Met(O), ha B jelentése L-Leu-L-Phe-OH, akkor A jelentése H-Q’'t -L-Thr-L-Ser-LGlu, aliol jelentése L-met és ha B jelentése L-Leu-L-Phe-L-Lys-OH, akkor A jelentése hidrogénatom, Z'2-L-Ser-L-Glu, ahol Z'2 jelentése H-L-Thr, H-L-Ala és ha B jelentése L-MeLeu-OH, akkor A jelentése Z* }-L-Ser-L-Glu, 184.720 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
