184720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-lipotropin hormon fragmens peptid származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 hidrokloridot (A.l.) és 1,1 ekvivalensnyi TFA-t adunk az elegyhez, amelyet 10 °C-on fél óráig, majd szobahőmérsékleten további 20 órán át keverjük. A 10 °C-ia történő hűtés után a TEA.-hidrok kloridot leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 225 ml etilacetátban és 55 ml vízben oldjuk, majd egymást követően 30%-os nátrium-kloridoldattal, 0,1 n sósavval, 30%-os nátrium-klorid-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és 30%os nátrium-klorid-oldattal mossuk. Az oldatot nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd szűrjük, szárazra pároljuk. Kf (To:EtOH/8:2) = 0,49 SiO2-on. 3. Boc-Gly-Phe-Met-OH Az A.2. pont szerint nyert peptidet 30 ml dioxán és víz (9:1) elegyében feloldjuk. 1,2 mól ekvivalens 2,17 n nátrium-hidroxid hozzáadása után az elegyet egy órán át szobahőmérsékleten keverjük, pH-ját 6-ra állítjuk, szárazra pároljuk. Ezt követően a maradékot 50 ml EtOAc-ban feloldjuk, miután a pH-értéket 1 n sósavval 2-re állítottuk. 30%-os nátrium-klorid-oldattal háromszor átmossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. Rj- % 0,62, kitermelés 95%. 4. A megfelelő metilészterek A.3. pont szerint végzett hidrolízise a következő védett peptideket eredményezi: Boc Leu-Phe-Met-OH Rf = 0,48 Boc-Ala-Phe-Met-OH Rp0,45 Dezamino-Phe-Met-OH Rf = 0,78 Boc-Phe-Met-OM Rf = 0,76 Boc-D-Phe-Met-OH Rf = 0,80 Az A.3. és A.4. szerinti rendszer: CHCI3 (MeOH)Wa (70:30:5) Si02 -n, B) H-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe és analógjának szintézise 1. H-Glu(OtBu)-Lys(Boe)-OMe a) 35,3 g Z-Glu(OtBu)-OH-t és 27,0 g HOB-t 150 ml DMF-ben oldunk, majd a keveréket —22 °C-ra híítjük. Ezt követően 100 ml DMF-ben lévő 29,7 g H-Lys(Boc)-OMe. HCl-t és 1 mól ekvivalens NEM-et adunk a lehűtött elegyhez, melynek a pH-ját NEM- mel 6,4-re állítjuk, majd 23 g DCCI-t adunk hozzá. Körülbelül —22 °C-on 15 percig, szobahőmérsékleten 12 órán át keverjük az elegyet, a DCHU-t szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 400 ml EtOAc-ban oldjuk és egymást követően 15%-os nátrium-klorid-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-szulfát-oldattal, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és 15%-os nátrium-klorid-oldattal mossuk. Szárítás és szűrés után a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot éter és petroléter 1:2 arányú keverékében kristályosítjuk. Olvadáspont: 54-56 °C, kitermelés: 86,6%. b) A B. 1. pont szerint nyert peptidet DMF-ben oldjuk, majd szénhordozós palládium katalizátort ( 10%) adunk hozzá és hidrogéngázt vezetünk át a széndioxid fejlődés megszűnéséig. Szűrés után a szűrletet szárazra pároljuk Rf(To:EtOH/8:2) = ü,_t SiOj-on. 2. Z-Thr-Ser-Nj II3 38,05 g Z-Thr-Ser-OMe-t (Recueil 83, 255, 1964) 12 ml etanolban oldunk, majd hozzáadunk 43 ml hidrazinhidrátot. Körülbelül két órás keverés után a szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük, etanol és víz 1:1 arányú keverékével mossuk, majd szárítjuk. Rf (CHCij :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,58 Si02 -on. Bomláspont: 215 216 °C. 3a. Z Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boe)-OMe 1,22 g B.2.pont szerint nyert hidrazidot 15 ml DMF-ben szuszpendálunk, majd 4,28 ml 2,42 n DMF és sósavat adunk hozzá. A tiszta oldatot -20 °C-ra hűtjük, 0,7 ml lAN-t adunk hozzá és körülbelül 30 percig keverjük 20 °C hőmérsékleten. Ezt követően az elegyhez 10 ml DMF-ben levő, 1,5 g B.l .pont szerint készült peptidet adunk. A reakció-elegy pH-ját 7,2-re állítjuk, majd 6 napon át hűtőszekrényben tartjuk. Ezután az oldószert lepároljuk és a megmaradó oldatot mossuk, végül szárazra pároljuk. Olvadáspont: 130 132 °C. Kitermelés: 61,9%. 3b. H-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe A B.l b) pontban leírtakhoz hasonlóan a Z-védett peptidet, metanolban faszénhordozós palládiumkatalizátorral hidrogénezzük. Kitermelés: 99%. Rf (B u :Py : Ac :Wa/3 8:24:8:30) = = 0,73 Si02-on. Az alábbi védett peptideket nyertük hasonló módon: dezamino-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe Rf (Bu:Py:Ac:Wa/38) = 0,80 Si02-on. Hf3-Ala-Ser Glu(OtBu)-Lys(ßoc)-OMe Rf (B u :Py :Ac ;Wa/38:24:8:30) = 0,66, H-Ala-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe Rf (Bu:Py :Ac:VVa/38:24:8:30) = 0,65 Si02-on. C) Z-Ser-Rj-Thr Phj-GM (R2 = Glu vagy Gin) szintézise 1. H-Thr-Pro-OtBu A B. 1. pont szerint 0,33 mól Z-Thr-OH-t és 0,35 mól H-Pro-OtBu-t kapcsolunk DMF-ben levő HOBt és DCC1 segítségével. Olvadáspont: 65 67 C. Kitermelés: 64%. Az ilymódon nyert Z-Thr-Pro-OtBu-t a B.3.b) pont szerint hidrogénezzük. Rf (To:EtOH/8:2) = 0,10 SiO,,-on. 2. H-Gln-Thr-Pro-01Bu 1,36 g H-Thr-Pro-OtBu-t oldunk 10 ml DMF-ben, majd hozzáadunk 1,93 g Z-Gln-ONp-t és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 20 órán át keverjük. Az oldatot szárazra pároljuk, a maradékot EtOAc-ban feloldjuk és egymást követően 5%-os k;ilium-hidrogénszuifá toldat tál és 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, 5%-os oldattal és telített NaCl oldattal mossuk. Az oldatot nátrium-szulfát fölött szárítjuk,, szűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Olvadáspont: 89- 90 °C. Kitermelés: 59%. A keletkező Z-védett peptidet a fentiekben leírt módon DMF-ben liidrogénezzük. Rf (CHCI3 :CH3OFl/8:2) = 0,8 Si02-on. 3. Z-Ser-Gln-Thr-Pro-OtBu A C.l. pontban leírtakhoz hasonló módon 20,5 g %-Ser-OH-t a C. 2. pont alatt nyert pepiiddel, DCCI és HOBt felhasználásával kapcsoljuk. Olvadáspont: 104 106 °C. Kitermelés: 70%. 4. Z-Ser-Gln-Tlir-Pro-OH 1,43 g C.3. pont szerint nyert peptidet szobahőmérsékleten 15 ml 90%-os TFA-val 30 percig keverjük. Az elegyet ezután éterhez öntjük. A szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük, éterrel mossuk és szárít184.720 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
