184714. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liposzóma-szuszpenziók tisztítására
1 2 5-fluor-uracil : 5-fluor-2,4(1 H ,3H)-pirimidin-dion Aminozidin-szulfát: 0-2,6-diamino-2,6-didezoxi--/5-L-idopirazonü-(l -3>0-ő-D-ribofurazonÜ-(l -5)-0- -(2-amino-2-dezoxi-a-D-glukopirazonil-(l-4)/-2-dezoxl-strepamin. 1. példa Egy elszappanosító lombikban kloroformban feloldottunk 1,5 g tojás lecitint, 0,4 g koleszterint és 0,2 g dicetil-foszfátot, majd az oldatot vákuumban szárazra pároltuk. Ezután 10 mgfml töménységű, 0,007 N foszfát pufferrel készült doxorubicin-hidroklorid oldatot öntöttünk a lombikba, és a szuszpenziót ultrahanggal ráztuk 1 percig, majd hagytuk a szuszpenziót nitrogénatmoszférában állni 30 percen át szobahőmérsékleten. A szuszpenzióhoz hozzáadtunk 2 g előzetesen aktivált, nátrium formára alakított gyantát (a sűlyérték a száraz súlyra vonatkozik, és 5 ml megduzzasztott gyantával egyenértékű), melyet metil-metakrilát polimerízációjával kaptunk, és amelyet speciális kémiai reagens — például divinil-benzol — megfelelően térhálósított, valamint karboxil funkcionalitással és térhálós makroszerkezettel rendelkezik, amely lehetővé teszi hidrofób oldatban való alkalmazását is. Ezt a gyantát a kereskedelemben IRC-50 néven forgalmazzák, gyártója Rohm és Haas. A lombikot 30 percen keresztül ráztuk, majd a szuszpenziót G 1 porózus szűrön átszűrtük. Az így kapott 0,5—2 mikrométeres és 60% kiindulási doxorubicint tartalmazó liposzómákat liofilizálással stabilizáltuk. 2. példa Az előbb ismertetett módszer szerint jártunk el, ugyanolyan mennyiségű lipidet és doxorubicint használtunk fel, csak az ultrahangos rázás idejét 10 percre növeltük annak érdekében, hogy 1 mikrométernél kisebb méretű liposzómákat kapjunk. Minthogy a liposzómák mérete nem tökéletesen egyforma, ezért nem szemcsés szerkezetű gyantát alkalmaztunk, mely egyben szűrő szerepét is betöltötte. Ezután hozzáadtunk 10 ml, előzetesen aktivált, nátrium formára alakított és a kereskedelemben DOWEX 50-x 4 100-200 Mesh névén ismert gyantát. Szűrés után egy szuszpenziót kaptunk, melyben a liposzómák mérete 0,2 és 0,8 mikrométer között változott, és 75% kiindulási doxorubicint tartalmazott. A liposzómákat liofüizálással stabilizáltuk. 3. példa A fentiek szerint előállított lipid fázist elszappanosító lombikba helyeztük, és hozzáadtunk egy 10 mgjml töménységű és 8 pH-jú 5-fluor-uracil-oldatot, melyet 0,007 normál foszfát-pufferrel készítettünk. A szuszpenziót az 1. példában ismertetett módon kezeltük, szűrő gyantaként 10 ml, előzetesen sósavval aktivált és a kereskedelemben Amberlite IRA-400 (Cl) néven ismert gyantát használtunk. A kapott liposzómákat liofüizálással stabilizáltuk. 4. példa A fentiek szerint 5-fluor-uracil liposzómákat állt toriunk elő a következő mennyiségű lipidekkel: 1,5 g tojás lecitin, 0,4 g koleszterin és 0,2 g sztearü-amin. Tisztító rendszerként 10 ml, előzetesen aktíváit és a kereskedelemben dovex 1 (50-100 Mesh) néven ismert gyantát használtunk. Az így kapott liopszómákat liofüizálással stabilizáltuk. 5. példa A 2. példa szerint jártunk el, kivéve azt, hogy a DOWEX 50W-X (100—200 Mesh) gyanta helyett 15 g, Rohm and Haas gyártmányú, XAD 7 nevű abszorbens gyantát használtunk, és a rázási időt 40 percre növeltük. G 1 szintereit üvegszűrőn történő átszűrés után 50% kiindulási doxorubicint tartalmazó liposzóma-szuszpenziót kaptunk. A liposzómákat liofüizálással stabilizáltuk. 6. példa Diklór-metánban feloldottunk 1,5 g szója lecitint, 0,4 g koleszterint és 0,3 g dicetil-foszfátot, és ehhez hozzáadtunk aminozidin-szulfát 0,02 M-os foszfátpufferrel készített 3 mg/ml töménységű és 6,5 pH-jú oldatát. A két fázist emulgeáltuk, majd az emulziót ráztuk, és szobahőmérsékleten a metüén-klorid teljes elpárolgásáig nitrogént buborékol tatunk át az emulzión. /A szuszpenziót 4 órán át stabilizáltuk szobahőmérsékleten, majd a lombikba 5 g száraz gyantával egyenértékű, IRC-50 nevű (Rohm and Haas) gyantát öntöttünk. Egy óra rázás után szintereit üvegszűrőn átszűrtük a liposzóma-szuszpenziót, abból a célból, hogy eltávolítsuk a szabad gyógyszert visszatartó gyantát, a liposzóma-szuszpenziót liofüizálással stabilizáltuk. 184.714 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
