184707. lajstromszámú szabadalom • Eljárás izotóposan jelzett gibberelin-aldehid-származékok előállítására
1 2 184.707 ten UV-fénnyel besugározzuk (THU 500, THELTA Elektroapparate, Zella-Mehlis). Az elegyet vákuumban bepároljuk és a maradékot 25 g kovasavon (Woelm) kromatografáljuk. n-Hexán/kloroform 1:9 tf-arányú elegyével eluálva 40 mg (Va) képletü gibberellin-As-(7)-aldehidet kapunk. Végül kloroformmal eluálva 195 mg (az elméleti 71%-a) (Vb) képletü ent-7 ,10,13-trihidroxi-7,15-ciklo-20-nor-gibberella-2,16-dion-19-sav-19,l0-laktont kapunk (kitermelés a reagált (Va) képletü vegyületre vonatkoztatva), IR (CHCI3): Xmav 3600-3610 (OH), 1770 (7-lakton-C'O), 1660 cnr ( C=CH2), MS: m/e 314 (M+). 195 mg (Vb) képletü vegyület 20 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát —78 °C-on argon alatt 2 ekvivalens lítium-diizopropil-amiddal reagáltatjuk (a lítium-diizopropil-amidot diizopropil-aminból és butil-lítiumból állítjuk elő). Ezután 1 ml 3 H2 O-t (fajlagos radioaktivitás 3 mCi/mmól) adunk hozzá és az elegyet szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk. Ekkor 1 ml jégecet hozzáadásával megszakítjuk a reakciót. Végül az elegyet bepároljuk, éterrel elegyítjük és az éteres oldatot többször vízzel kirázzuk, szárítjuk, bepároljuk és a maradékot 15 g kovasavon (Woelm) kromatografáljuk. n-Hexán/kloroform 1:9 tf-arányú elegyével eluálva 123 mg (az elméleti 63%-a) amorf (Ve) képletü [15-3H]-gjbberellin-A5-(7)-aldehidet kapunk: IR (CHCI3): 7max 3600 (OH), 2725, 2820 és 1725 (aldehid) és 1775 (7-Iakton-CO), MS: m/e 314 (M+). A fajlagos radioaktivitás 1,4 mCi/mmól. 8. példa 31,4 mg (0,1 mmól) Via) képletü gibberellin-A7-7-aldehidet oldószer nélkül, kristályos formában UV-fénnyel (THU 500, THELTA Elektroapparate) kvarccsőben léghűtés és forgatás közben 80 órán keresztül besugározzuk. Ezután az anyagot 1,5 g kovasavon (Woelm) kromatografáljuk. n-Hexán/kloroform 1:9 tf-arányú elegyévcl 3,6 mg reagálatlan (Via) képletü veevületet kapunk. Kloroform/ecetsav-etilészter 2:8 tf-arányú elegyével tovább eluálva 15,3 mg (az elméleti 82%-a) amorf (VIIb) képletü ent-2a,3a,7 ,10,13-pentahidroxi-7,- 15-cikIo-20-nor-gibberella-1,16-dién-19-sav-19,10- -laktont kapunk (kitermelés a reagált (Vila) képlett! vegyületre vonatkoztatva), IR (Nujol): nmax 3400 br. (OH) és 1755 (7-lakton-CO), MS: m/e 348 (M4). 17 mg (VIb) képletü vegyületet 2 ml metanolban oldunk és 0,1 ml 3H20-t (fajlagos rádióaktivitás 3 mCi/mmól) adunk hozzá. Az elegyet ioncserélőre viszszük és (Woelm) n-haxán kloroform 1:9 tf-arány8 elegyével (kromatografáljuk, így 8,8 mg (az elméleti 52%-a) (VIc) képletü [ l5-3Hl-gibberellin-A7-7-aldehidet kapunk: op: 183—187 C, IR (CHC13): Pmax 3610 (1H(, 2720, 2820, 1725 (aldehid), 1775 (7-taftton-CO), 1665 cm'1 ( C=CH2), MS: m/e 314 (M ). A fajlagos radioaktivitás 20 juCi/mmól. 9. példa 34,8 mg (0,1 mól) (Vila) képletü gibberellin-AB-7-aldehidet 6 ml tetrahidro-furánban feloldunk és 60 órán keresztül yPyrex-csőben UV-fénnyel (THU 500, THELTA Eleketroapparate) besugározzuk. Ezután az elegyet vákuumban bepároljuk és a maradékot 4 g kovasavon kromatografáljuk. Kloroform/ecetsav- 5 -etilészter 4:6 tf-arányú elegyéven 16,2 mg reagálatlan gibberelliri-A8-7-aldehidet kapunk. Kloroform/ecetsav-etilészter 2:8 tf-arány8 elegyével tovább eluálva 15,3 ing (az elméleti 82%-a) amorf (Vllb) képletü ant-2a,3a,7, 10,13-pentahidorxi-7,15-ciklo-20-nor-gibberella-1,16-dién-19-sav-19,10-laktont kapunk (ki- 10 termelés a reagált (Vila) képletü vegyületre vonatkoztatva), IR (Nujol): p 3400 br. (OH) és 1755 (7-lakton-CO), MS: m/e T48 (M4). 1 ml 43 ci/mmól fajlagos radioaktivitású n-propiltioalkohol (n-C3H7S- H) és 3,2 mg lítiumot tar< c talmazó 0,1 ml n-hexános butil-lítium-oldat felhasználásával készített tríciumozott lítium-n-propü-merkaptid-oldathoz 15 mg (Vllb) képletü vegyületet adunk. Egy óra múlva 0,1 ml jégecetet adunk hozzá és az elegyet vákuumban bepároljuk. Az ezt követő kromatográfia 1 g kovasavon kloroform/ 20 /ecetsav-etilészter 4:6 tf-arányú elegyével 8,1 mg (az elméleti 54%-a) amorf (VIIc) képletü [ 15-3 H]-gibberellin-Ag-7-aldehidet eredményez (fajlagos radioaktivitás 30 /iCi/mmól): IR (Nujol): Pmax 3400 br. (OH), 1755 (7-lakton-CO), 1720 cní * (aldehid), MS: m/e 348 (M4). 25 10. példa 30 35 40 Kvarccsőben 1 ml tríciumozott terc-butanolban (fajlagos radioaktivitás 34 pCi/mmól C4H90- -3H) oldott 3 mg (0,01 mmól) (Villa) képletü gibberellin-A9-7-aldehidhez 3 mg kálium-terc-butilátot adunk. Ezután az oldatot 23 órán keresztül levegőhűtés közben UV-fénnyel (THU 500, THELTA Elektroapparate) besugározzuk. Végül 0,1 ml jégecetet adunk hozzá és vákuumban bepároljuk. Az ezt követő kromatográfia 0,5 g kovasavon n-hexán/ /kloroform 1:1 tf-arányú elegyével 1,7 mg (az elméleti 57%-a) amorf (VIIIc) képletü [15-3H]-gibberellín-A9-(7)-aldehidet eredményez (fajlagos radioaktivitás 286 juCi/mmól) IR (CHC13): Pmax 2830, 2725 és 1725 (aldehid) és 1775 (7-lakton-CO), MS: m/e 300 (M4). 11. példa 3,2 mg (0,01 mmól) (IXa) képletü gibberellin-A| 2-7-aldehidet 1 ml ecetsav-etilészterben oldunk 45 és argon gáz alatt kvarccsőben nagynyomású higanyégővel (THU 500, THELTA Elektroapparate, Zella-Mehlis) 32 órán keresztül besugározzuk (léghűtés). Az elegyet vákuumban bepároljuk és kovasavon vékonyrétegkromatográfiásan elválasztva 0,7 mg (IXa) í-fj képletü gibberellin-Ai2-(7)-aldehidet és 2,2 mg (az elméleti 88%-a) (IXb) képletü ent-7£-hidroxi-7,15-ciklo-gibberella-16-on-19-savat kapunk (kitermelés a reagált (IXa) képletü vegyületre vonatkoztatva): MS: m/e 316 (M+). 37 Ci/mmól fajlagos radioaktivitású CH30-3H 55 és 1 mg nátrium felhasználásával készített 0,1 ml tríciumozott nátrium-metilát-oldathoz 2,2 mg (IXb) képletü vegyületet adunk. 20 perc múlva befejezzük a reakciót 0,1 ml jégecet hozzáadásával és az elegyet vákuumban bepároljuk. Az ezt követő vékonyrétegkromatográfia kovasavon 1,3 mg (az 50 elméleti 59%-a) (IXc) képletü [15-3H]-gibberellin-6
