184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 radékot 20 ml terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk, így a fenti képletnek megfelelő, vékonyrétegkromatográfiásan egységes anyagot kapunk. V ékony rétegkromatogram : kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,18, kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf — 0,77. 2. példa L Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba — Az 1. példában leírtakhoz hasonló módon az !— > Asn-Phe-Fhe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-Gaba J védett nonapeptidet trifluorecetsawal kezeljük, és a terméket feldolgozzuk. Ezt a terméket 200 elemmel ellenáramú megoszlásnak (K = 5,45) vetjük alá és így az előállítani kívánt terméket vékonyrétegkromatográfiásan egységes amorf anyagként kapjuk. Vékony rétegkromatogram (Merck cellulóz) 101. rendszer: Rf = 0,90, Î11B. rendszer: Rf = 0,75, 112A. rendszer: Rf = 0,93. A kiindulási anyagként alkalmazott védett nonapeptidet a következőképpen állítjuk elő: 2.1 művelet Boc-Gaba-OH 41,25 g H-Gaba-OH 320 ml dioxán-víz (1:1 térfogatrész) keverékével készített oldatának pH-értékét 20,5 ml 4 n nátriumhidroxiddal 10,0-ra beállítjuk, és az oldathoz 63,0 g Boc-azidot adunk. A reakciókeverékhez lassan 24 órán át szobahőmérsékleten összesen 185 ml 4 n nátriumhidroxidot adva a pH értékét 10,0-en tartjuk. Ezután a reakcióoldatot 250—250 ml éterrel háromszor mossuk, és a vizes fázis pH-értékét 5°-on 192 g citromsavat hozzáadva 3,0-ra beállítjuk. A kivált anyagot 3 részletben 400 ml éterrel felvesszük, és az egyesített szerves fázisokat semlegesre mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároijuk. A maradékot 50 ml éterben feloldjuk, és 100 ml petrolétert hozzáadva kristályosítjuk. A termék olvadáspontja 60-62°. Vékonyrétegkromatogram : kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,83, benzol-aceton (7:3), Rf = 0,21. 2.2 művelet Boc-Gaba-Gaba-OBzl 2,03 g Boc-Gaba-OH (2.1 művelet) 20 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához —15°-on először 1,39 ml trietilamint, majd 1 perc alatt 1,31 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk. A reakciókeveréket 10 10 percig (10-15)°-on tartjuk, majd -15°-on hozzáadjuk 3,65 g H-Gaba-OBzl-p-toluolszulfonát (1.7A művelet) és 1,39 ml trietilamin 10 ml dimetilformamiddal készített oldatát, és a reakciókeveréket 1—1 órán át —10°-on, 0°-on és szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután a keverékhez 150 ml etilacetátot adunk, és 1 n citromsavval háromszor, 1 n nátriumhidrogénkarbonáttal háromszor, vízzel ugyancsak háromszor mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó gyengén sárgás színű olajat nagy vákuumban az oldószernyomoktól megszabadítjuk. A termék vékonyrétegkromatográfiásan egységes. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol (85:15), Rf — 0,60, toluol-aceton (7:3), Rf = 0,17. 2.3 művelet H-Gaba-Gaba-OBzl-hidroklorid 2,00 g Boc-Gaba-Gaba-OBzl (2.2 művelet) 15 ml 2 n etilacetátos sósavoldattal készített oldatát 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakciókeveréket 0°-ra lehűtjük, a kivált terméket kiszűrjük, 20 ml éterrel mossuk, és vákuumban szárítjuk. A termék olvadáspontja 80—83°. Vékonyrétegkromatogram: kloroform-metanol-víz (14:6:1), Rf = 0,29. 2.4 művelet Z-A sn-Phe-Phe-(D- Trp)-Lys ( Bocj- Thr(But)Phe-Gaba-Gaba-OBzl 430 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-OH (1.7 művelet) és 142 mg H-Gaba-Gaba-OBzlhidroklorid (2.3 művelet) 3 ml dimetilformamiddal készített oldatához 45 mg trietilamint, 61 mg 1-hidroxibenzotriazolt, valamint 93 mg N,N'-diciklohexilkarbodiimidet adunk, és a reakciókeveréket 24 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakciókeverékhez 15 ml vizet adunk, a kivált anyagot kiszűrjük, és vákuumban foszforpentoxid felett szárítjuk. Tisztítás céljából a nyersterméket 5 ml forró metanollal eldörzsöljük, leszívatjuk, vákuumban szárítjuk, és 2 ml dimetilformamidban oldva 10 ml metanollal kicsapjuk. A csapadékot kiszűrjük, kevés metanollal mossuk, és vákuumban szárítjuk. így vékonyrétegkromatográfiásan egységes terméket kapunk. Vékonyrétegkromatogram : kloroform-metanol (85:15), Rf = 0,80. 2.5 művelet H-A sn-Phe-Phe-(D- Trp )-Lys ( Bocj-Thr( But)Phe-Gaba-Gaba-OH Ezt a vegyületet az 1.9 műveletben leírtakhoz hasonlóan állítjuk elő, a Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-Gaba-Gaba-OBzl (2.4 művelet) hidrogénezésével. Az így kapott terméket tisztítás nélkül dolgozzuk tovább a 2.6 műveletben. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
