184612. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szomatosztatin-tipusú ciklopeptidek előállítására
1 184 612 2 500 mg Z-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe- Gaba-OBzl 20 ml dimetilformamiddal készített oldatát 50 mg 10%-os palládiumozott/szén katalizátor jelenlétében 2 órán át hidrogénezzük. Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban erősen bepároljuk, 5 a maradékhoz 370 ml dimetilformamidot, 560 mg N-hidroxi-benzotriazolt és 760 mj> DCCI-et adunk, és a reakciókeveréket 18 órán át 50 -on állni hagyjuk. A termék feldolgozását és tisztítását a 8.2 művelet szerint végezzük, K = 0,3. 10 Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer: Rf = 0,45. 10. példa 15 - Asn-Phe-Phe-(D-T rp)-Lys-Thr-Phe-Gly— 600 mg 20 — Asn-Plie-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gly — védett peptidet az 1. példában leírtak szerint trifluor- 25 ecetsawal kezeljük, feldolgozzuk, és tisztítjuk. K = 3,5. Vékonyrétegkromatogram: 157 C rendszer: Rf = 0,15. A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 10.1 művelet Z-Ans-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)- 35 Phe-Gly-OBzl 230 mg Z-Asn-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe- OH (1.7 művelet), 77 mg H-Gly-OBzl.p-toluolszulfonát és 35 mg N-hidroxi-benzotriazol 1 ml dimetilformamid- 40 dal készített oldatához 0°-on 0,025 ml N-metil-morfolint és 53 mg DCCI-et adunk. A reakciókeveréket 16 óra múlva a 7.1 művelet szerint feldolgozzuk, és acetonitrilvíz (4 :1) keverékéből átkristályosítjuk. Vékonyrétegkromatogram: 157A rendszer. Rf = 0,65. 10.2 művelet 45 50 L Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gly — 200 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-Trp)-Lys(Boc)-Thr(But)Phe-Gly-OBzl (10.1 művelet) 15 ml dimetilformamiddal 55 készített oldatát 50 mg 10%-os palládiumozott/szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet nagyvákuumban bepároljuk, a maradékhoz 140 ml dimetilformamidot, 215 mg N-hidroxi-benzotriazolt és 290 mg DCCI-et adunk, és 6° a reakciókeveréket 20 órán át 50°-on állni hagyjuk. A termék feldolgozását és tisztítását a 8.2 művelet szerint végezzük, K = 0,8. Vékonyrétegkromatogram : 157B rendszer: Rf = 0,45. 65 L Asn-Phe Phe-[D-Trp(F)]-Lys-Thr-Phe-Gaba ~ 340 mg 11. példa —A;n-Phe-Phe-[D-Trp(F)]-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-Gaba-védett peptidet az 1. példában leírtak szerint trifluorecetsavval kezelünk, ioncserélőn acetát formává alakítjuk, és terc-butanol-toluol-metanol-puffer (0,05 mólos ammóniumacetát + 0,05 mólos ecetsav) (7:7:3:10) rendszerben 500 lépcsőben ellenáramú megoszlással tisztítjuk (K = 0,14). A [D-Trp(F)] jelentése 5-fluor-D-triptofán. Vékonyrétegkromatogram: 157. rendszer: Rf = 0,36. A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 11.1 művelet Z-[D-Trp(Fj]-OH 2 g 5-fluor-DL-triptofánt 9 ml 1 n nátriumhidroxidban feloldunk, és az oldathoz jeges hűtés és erélyes keverés mellett egyidejűleg 1,4 ml klórhangyasav-benzilésztert és 10,5 ml 1 n nátriumhidroxidot adunk. 2 óra múlva a keverékhez 50 ml etilacetátot adunk, a kétfázisú keverék pH-értékét sósavval 1-re beállítjuk, a szerves fázist elkülönítjük, vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. A maradékot 9,5 ml víz és 5 ml 2-n nátriumhidroxid keverékében feloldjuk, az oldathoz 1,5 ml anilint, 100 mg L-ciszteinhidrokloridot és 34 ml 0,2 mólos citrát-puffert (pH = 5) adva a kiindulási anyag részben újra kiválik, a szuszpenzió pH-értékét 2 n sósavval 6,3-re beállítjuk. 260 mg papaint 2 ml 40°-os vízben szuszpendálunk, az oldhatatlan részt kicentrifugáljuk, 1,9 ml felülúszó oldatot a fenti szuszpenzióhoz adunk, és 20 órán át 40°-on keverjük. Ezután a keverék pH-értékét jeges hűtés közben 2 n nátriumhidroxiddal 8-ra beállítjuk, az oldhatatlan Z-[L-Trp(F)]-anilidet kiszűrjük, a szűrlet pH-értékét 5 n sósavval 5,3-ra beállítjuk, és mint fent, ciszteinhidrokloridot és papaint adunk hozzá. További 20 óra múlva a képződött anilidet ismét kiszűrjük, és a szűrletet a fenti módon még egyszer három napig kezeljük, ekkor az anilid már csak nyomokban válik ki. A szűrletre etilacetátot rétegzünk, a pH értékét i-2-re savanyítjuk, a szerves fázist vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot diizopropiléterhexáa keverékéből átkristályosítjuk. Vékonyrétegkromatogram: 157B rendszer. Rf = 0,3. 11.2 művelet Z- [D- Trp (F) }-Lys (Bo c)-OH 1,15 g Z-[D-Trp(F)] OH-t az 1.3A műveletnél leírtak szerint a cím szerinti dipeptiddé alakítunk. Vékonyrétegkromatogram: 157B rendszer: Rf = 0,33. 15
