184481. lajstromszámú szabadalom • Eljárás étvágycsökkentő hatású tripeptidek előállítására
1 184 481 2 A táblázat adataiból látható, hogy az adott kísérleti feltételek mellett sem a TRH, sem a Glp-His- Gly-OH nem csökkentette jelentősen a kisérleti állatok táplálékfelvételét, míg az (1) általános képletü vegyületek egyes reprezentásai a táplálékfelvételt 5 szignifikánsan csökkentették. A találmány szerinti peptideket, valamint ezek sóit és komplexeit a szokásos gyógyszerkészítmények formájában használhatjuk fel a gyógyászatban. Az ilyen gyógyszerkészítmények a találmány 10 szerinti vegyületeket enterális vagy parenterális beadásra alkalmas szervetlen vagy szerves vivőanyagok kíséretében tartalmazzák. A gyógyszerkészítmények lehetnek szilárd liofilizátumok is, amikoris vivőanyagként a peptidekkel nem reagáló anyagok, 15 például szénhidrátok jöhetnek tekintetbe; lehetnek továbbá híg vagy tömény szuszpenziók vagy emulziók, amelyek különböző tartósító és stabilizáló segédanyagokat is tartalmazhatnak. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli 20 módjait közelebbről két általános példával szemléltetjük és az ezen módszerek valamelyikével előállított vegyületeket fizikai állandóikkal táblázatban foglaltuk össze. A példákban alkalmazott rövidítések a szakirodalomban elfogadott rövidítéseknek felelnek meg [J. Biol. Chem. 247, 977 (1972)]. További rövidítések: Abu = L-2-amino-vajsav; Ada = L-2-aminodekánsav; Cha = L-ciklohexilalanin; Kic=L-2- keto-imidazolidin-4-karbonsav ; Tea = L-tiazolidin-4-karbonsav. A vegyületek előállítása során a bepárlásokat mindig Büchi-féle Rolavapor „R” készülékben végeztük. Az olvadáspont-meghatározások Dr. Tot- 35 toli-féle (Büchi) készülékben történtek. A vékonyréteg-kromatogramokat Stahl szerint készített Kieselgel G (Merck) márkanevű szilikagél rétegen készítettük, A kromatogramok kifejlesztésére a következő oldószerelegyeket használtuk: 4c (1) etilacetát : PAW = 3:2 (2) etilacetát : PAW =1:1 (3) n-butanol : ecetsav : víz = 3 : 1 : 1 PAW = piridin : ecetsav : víz = 20 : 6 : 11 A vékonyréteg-kromatogramok előhívása egy- 45 részt ninhidrinnel, másrészt klór-tolidin-KJ módszerrel történt. Egyes anyagok tisztításához 0,062 — 0,2 mm szemcseméretű, Kieselgel G minőségű szilikagéllel töltött oszlopokat használtunk. 50 25 30 zá. A reaktánsok feloldódása után az oldathoz 6,18 g (30 mmól) diciklohexil-karbodiimid 40 ml diklórmetános oldatát adagoljuk. A reakcióelegyet 2 órán át 0 °C-on keverjük, majd a diciklohexilkarbamidot kiszűrjük. A szürletet háromszor 30 ml n sósavoldattal, háromszor 30 ml n nátrium-hidrogén- karbonát-oldattal és egyszer 30 ml vízzel kirázzuk A diklór-metános oldatot vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Az így kapott 9,7 g olajszerü Boc-Leu-Pro-OMe-t feloldjuk 43 ml dioxánban és az oldathoz keverés közben 43 ml n nátrium-hidroxid-oldatot adagolunk. A reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd n sósavoldat hozzáadásával semlegesítjük. A dioxán ledesztillálása után kapott vizes oldatot 60 ml kloroform mellett tömény sósavoldattal pH 2-re savanyítjuk. Elválasztása után a vizes oldatot még kétszer 30 ml kloroformmal kirázzuk, az egyesített kloroformos oldatot vízzel kirázzuk és vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. Az oldószer eltávolítása után kapott 9 g olajos Boc-Leu-Pro- OH-t 25 ml etil-acetátban oldjuk és az oldathoz 25 ml 5 n sósavas etil-acetátot öntünk. A reakcióelegyet 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd éteres hígítás után a kiválj csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. így 6,48 g (81,5 % Boc-Leu-OH-ra számítva) H-Leu-Pro-OH.HCl-t kapunk, mely kromatográfiásan egységes, fehér, nedvszívó anyag. Rf-0,20; Rf = 0,41. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piröglutamil-L-leucil-L-proiin 2,09 g (7,87 mmól) H-Leu-Pro-OH.HCl-t 2,2 ml trietil-amint és 3,88 g (7,87 mmól) benziloxikarbonil-L-piroglutaminsav-pentafluor-fenilésztert 50 ml kloroformban oldunk és 10 perc elteltével 1,1 ml (7,87 mmól) trietil-amint adunk hozzá, majd az oldatot éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk Ezután a reakcióelegyet háromszor 10 ml n sósavoidattal és kétszer 10 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az olajos bepárlási maradékot éterrel kristályosítva 3,15 g nyers terméket kapunk, amelyet 10 ml etil- acetátból átkristályosítunk. így 2,7 g (73,5 %) kromatográfiásan egységes Z-Glp-Leu-Pro-OH-t kapunk. OP.: 98- 100 °C 1. példa L-Piroglutamil-L-leucil-L-prolin 55 7. lépés L-Leucil-L-prolin.HCl 60 5,5 g (33 mmól) Pro-OMe.HCl-í feloldunk 80 ml diklórmetánban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben először 4,52 ml (33 mmól) trietil-amint, majd 6,93 g (30 mmól) Boc-Leu-OH-t adunk hozob 3. lépés 4,13 g (8,7 mmól) Z-Glp-Leu-Pro-OH-t feloldunk 80 ml etanolban és az oldaton 0,8 g 10 %-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadása után, 1 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk és az amorf maradékot éterrel eldörzsölve szűrjük. A 2,8 g nyersterméket 20 ml vizben oldjuk, csontszénnel derítjük és az oldatot liofilizáljuk. így 2,6 g (91 %) amorf, kromatográfiásan egységes Glp- Leu-Pro-OH-t kapunk. Rj = 0,33. 3
