184256. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású antibiotikum komplexek előállítására
1 184 256 2 A találmány tárgya eljárás rákellenes hatású antibiotikum-komplex, valamint egyes komponenseknek előállítására. A mellékelt spektrumok és az ismertetett fizikai-kémiai adatok alapján a jelen leírásban ismertetett rákellenes hatású antibiotikum-komplex szerkezetileg hasonló a Dell és munkatársai által leírt kinoxalin típusú echinomicinhez [J. Am. Chem. Soc., 97,2497 (1975)], a Shoji és munkatársai által leírt kinomicinhez [J. Antibiotics, 14A, 335 (1961)] és a triosztin C-hez [Merck Index, 9. kiadás, 9399)]. A tárgyalt rákellenes hatású antibiotikum-komplex azonban a következőkben különbözik ezektől az antibiotikumoktól: 1. A teljes komplex és komponensei az aktinoleukin antibiotikum-csoportra jellemző kinoxalin helyett lanolin magot tartalmaznak kromofórként. 2. A teljes komplex és komponensei az aktinoleukin antibiotikumok szerkezetében előforduló diszulfid vagy tioacetál-híddal ellentétben nem tartalmaznak kénatomot. 3. A teljes komplex és komponensei az aktinoleukinokhoz képest, melyek jó baktériumellenes antibiotikumok, viszonylag gyenge mikróbaellenes hatást mutatnak. A találmány tárgya eljárás új rákellenes hatású antibiotikum-komplex (jele BBM-928) előállítására. A legalább hat komponenst tartalmazó komplex előállításához a találmány szerinti eljárás előnyös kivitelezési módja szerint úgy járunk el, hogy egy a BBM-928-at termelő Actinomyces-t (ATCC 31 491), vagy ennek egy mutánsát használjuk süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, vizes táptalajban. A találmány tárgya továbbá eljárás a BBM-928 komplex kinyerésére a táptalajból és a komplex szétválasztására biológiailag aktív komponenseire ellenáramú megoszlási és kromatográfiás technikák alkalmazásával. A találmány oltalmi köre kiterjed a BBM-928 komplex és a biológiailag aktív komponensek, a BBM-928 A, B, C, D, E és F előállítására. A leírás további részében elsősorban a BBM-928 A, B, C és D komponensekkel foglalkozunk, melyek híg oldatokban, valódi sűrítményekben és tisztított alakban léteznek. A következőkben ismertetjük az egyes komponensek spektrumait. Az 1. ábra a BBM-928 A kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be. A 2. ábra a BBM-928 B kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be. A 3. ábra a BBM-928 C kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be. A 4. ábra a BBM-928 D kálium-bromidban felvett infravörös spektrumát mutatja be. Az 5. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 A-nak 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként. A 6. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 B-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként. A 7. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 C-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként. A 8. ábra a deuterált kloroformban oldott BBM-928 D-nek 90 MHz frekvencián működő mágneses magrezonancia spektrométerrel felvett mágneses magrezonancia spektrumát mutatja, tetra-metil-szilánt alkalmazva belső standardként. A találmány tárgya eljárás új, BBM-928 jelű rákellenes hatású antibiotikum-komplex előállítására. A komplex szerkezetileg feltételezhetően az aktinoleukin antibiotikum-csoporthoz tartozik, és egy eddig nem azonosított Aktinomyces törzs tenyésztése során keletkezik. Bármelyik, a BBM-928 termelésére képes Aktinomyces használható a termelő táptalajban, előnyösen a Bristol-Banyu törzsgyűjteményben G455-101 számmal letétbe helyezett Aktinomyces törzs. A mikroorganizmust a Fülöp-szigeteken gyűjtött talajmintából izoláltuk, és az Amerikai Nemzeti Törzsgyűjteményben ATCC 31 491 számon helyeztük letétbe. A jelen találmányban tárgyalt új, rákellenes hatású antibiotikum-komplex hat komponensből áll, ezeket BBM-928 A, B, C, D, E és F betűkkel jelöljük. A BBM-928 komplex A, B, C és D komponenseit kristályos formában izoláltuk, A, B és C kémiai szerkezetét meghatároztuk. A szabadalomban szereplő komplex és az egyes komponensei rákellenes hatással rendelkeznek. Ami a baktériumellenes hatást illeti, a komplex és egyes komponensei állati tápszer kiegészítőként, valamint emlősöknél bakteriális fertőzés elleni terápiás hatású szerként használhatók. Az említett antibiotikumokat ezenkívül laboratóriumi üvegeszközök, valamint sebészeti eszközök tisztítására és sterilezésére használhatjuk, közegészségügyi célokra pedig szappanokkal, detergensekkel és vizes oldatokkal kombinálva alkalmazhatjuk. A komplex és egyes komponensei igen hatásosak különféle, egérbe intraperitoneálisan beültetett rákos daganat ellen. A következőkben a BBM-928 rákellenes hatású antibiotikum-komplexet termelő, kiválasztott organizmus általános leírását adjuk meg. A standard taxonómiai módszerekkel [Shirling és munkatársai, Int. J. Syst. Bacterid., 16, 313 (1966), valamint Lechevalier és munkatársai, Biol. Actinomycètes Related Org., 11, 78 (1976)] összhangban megfigyeltük az organizmus tenyésztési, élettani és morfológiai tulajdonságait. A G455—101 törzs táptalaj és légmicéliumot is fejleszt, a táptalaj-micélium jól fejlett, hosszú és elágazó (0,5-0,8 ju átmérőjű). A táptalaj-micélium határozott töredezését nem figyeltük meg. A közönséges Streptomyces fajoktól eltérően, a G455-101 törzsnek csak rövid vagy csökevényes légmicéliuma van, néhány agar-táptalajon nem fejleszt légmicéliumot. A légmicéliumon rövid vagy hosszú spóra-láncok képződnék, melyek egy láncban 2-50 ovális spórát tartalmaznak (legtöbbször 5-20 spórát). A spóraláncok egyenesek, hajlékonyak vagy hurkot képeznek. A spórák gömbölyűek (0,3-0,4 ju), oválisak vagy hengeresek (0,3 X 1,5—3,0 íu) és sima felületűek. A spórákat gyakran üres fonalak választják el egymástól. A légmicéliumon alkalmanként alaktalan spóratartószerű képződmény figyelhető meg, mely rövid, összecsavarodott spóraláncokat borít. A G455—101 törzs sejtfala mezo-diamino-pimelinsavat tartalmaz, de nem tartalmaz glicint. A teljes sejthidrolizátumban glükózt, mannózt és madurózt (3-O-metil-D-galaktóz) találtunk. A fent említett sejtfal-össze-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
