184141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint ilyen partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot tartalmazó kompozíciók előállítására
7 8 184 14: b) eljárásváltozat Az 1. ábrán megadott készülék mindkét tartályát feltöltjük, az 1 tartályba az előre elkészített lecitin és koleszterin absz. alkoholos oldatát töltjük, a 2 tartályba 5 vizes elektrolit oldatot töltünk. A keverés megindítása után a 4 keverőtartályba folytatjuk, v. csepegtetjük, esetleg beporlasztjuk az 1 és 2 tároló tartályok tartalmát. Keverés után a 4 tartályból a szuszpenziós elegy az 5 túlfolyó csövön keresztül a 6 gyűjtő tartályba jut. Itt a 10 keverést addig folytatjuk, míg a kívánt mennyiségű partikula szuszpenzió elkészül. A szuszpenziót 30 percig 6000 ford/perc sebességgel centrifugáljuk majd dekantáljuk. A csapadékot desztillált vízzel vesszük fel és tökéletesen homogenizáljuk, 15 majd ultrahangozzuk. Dozirozás után liofilezzük és sugársterilezzük. Az ilyen módon előállított üres partikula liofilezett formában egységnyi mennyiségben (partikula egység) 11,2 mg szárazanyagot tartalmaz és ez megfelel 1,5—2, 5x10® partikula számnak. 20 ej eljárásváltozat Az 1. ábrán megadott készülék mindkét tartályát 25 feltöltjük. Az 1 tartályba az előre elkészített lecitin és koleszterin absz. alkoholos oldatát töltjük. A 2 tartályba vizes elektrolit oldatot teszünk. A keverés megindítása után a 4 keverőtartályba folyatjuk vagy csepegtetjük, esetleg beporlasztjuk az 1 és 2 tároló tartályok tártál- 30 mát. Keverés után a 4 tartályból a szuszpenziós elegy az 5 túlfolyó csövön keresztül a 6 gyűjtőtartályba jut itt a keverést addig folytatjuk, míg a kívánt mennyiségű partikula szuszpenzió elkészül. A szuszpenziós elegyet 30 percig 6000 ford/perc sebességgel centrifugáljuk majd 35 dekantáljuk. Közvetlen felhasználás esetén fiziológiás konyhasó-oldatban előre felvesszük a kívánt biológiailag aktív anyagot és a nyert csapadékot ebben szuszpendáljuk, homogenizáljuk és ultrahangozzuk. Későbbi felhasználás esetén a csapadékot úgy vesszük fel, hogy 40 desztillált vízben vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolitoldatban előre elkészített biológiailag aktív anyagot adjuk a csapadékhoz, azzal tökéletesen homogenizáljuk, ultrahangozzuk és 5-10 percig 37-°C-on inkubáljuk, dozirozzuk és liofilezzük. A liofilezett anyagot 45 sugársterilezzük. d) eljárásváltozat 50 a b) eljárásváltozat szerint előállított partikulák adjuvánsként bármilyen biológiailag aktív anyaghoz felhasználhatók. 55 Kiviteli példák 1. példa Hepatitis antitest termelése Hepatitis vírusokat élő és elölt formában kötünk a 60 partikulákhoz, olyan módon, hogy egy liofilezett partikula egységhez (b) eljárásváltozat szerint állítjuk elő) 109 vírus partikulát adunk. Az ilyen módon kialakított immunizáló anyaggal az irodalomból ismert ellenanyagszint értékeknél magasabb értékeket tudunk elérni. 2. példa Protektiv hatás kiváltása inaktivált myxomatosis vírus vakcinával Jelenleg az állatgyógyászati gyakorlatban ezen vírussal szemben immunizálásra általában csak az élővírussal készült oltóanyag bizonyult protektívnek. Nyulakat inaktivált myxonatozis vakcinával oltunk be, ahol a fertőzési víruspartikula száma 108/ml. A nyulakat 1 partikula egységhez (b) eljárásváltozat) kötött egy ml vakcinával subeutan oltjuk. 30 nappal az oltást követően elvégzett ellenőrző fertőzés alapján az így elkészített és felhasznált vakcina az ellenőrző fertőzés 100 infektív dózist képviselő élővírussal szemben is teljes védettséget biztosít. Abban az esetben, ha az egységnyi partikula az a) eljárásváltozat szerint készül, úgy az elérhető ellenanyagszint hasonlóan végzett immunizálással 10 infektív dózis kivédését eredményezi. 3. példa Treponematozisok elleni immunitás Treponema pallidium Budapest törzs feltárt sejtjeiből (107/ml) ultrahangos kezeléssel állítunk elő antigént, amit milliliterenként két egység liofilezett partikulához (b) eljárásváltozat) kötünk. Az állatokat hetenként oltjuk összesen hat alkalommal, 1 ml antigén tartalommal intramuscularis, intravénás és subeutan oltás váltogatásával. Az ilyen módon kezelt állatokban magas specifikus ellenanyag szintet és chamker immunitást tudunk kialakítani. 4. példa Tetanusz elleni immunizálás a) Egységnyi mennyiségű partikulához (b) eljárásváltozat) egységnyi mennyiségű tetanusz toxoidot kötünk. Az anyagot liofilezzük. Felhasználás előtt az anyagot eredeti térfogatnyi fiziológiás konyhasó oldatban reszuszpendáljuk. A hatékonysági vizsgálatot az amerikai, angol és magyar gyógyszerkönyvek (USP, BP, PhH g VI) szerint tengeri malacon végezve megállapítható, hogy az anyag specifikus tetanusz elleni immunogenitása lényegesen magasabb értékű, mint a hivatalos előírásokban meghatározott immuneffektus mértéke. A vizsgálatokat elvégezzük az a) és c) eljárásváltozat szerint előállított oltóanyagokkal is. Az eredmények az előzőekkel azonosak. b) Egységnyi mennyiségű partikulához (b) eljárásváltozat) különböző mennyiségű tetanusz toxoidot kötünk. Az anyagot liofilezés után a liofilezés előtti térfogatnak 5
