184123. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szívglükozidok kinyerésére vizes vagy vizes-szerves oldószeres oldataikból
5 6 juk le a szénről. A találmány szerinti eljárás egy előnyös kiviteli módja szerint célszerűen úgy járunk el, hogy a vizes vagy vizes-szerves oldószeres oldatot, mely lehet leszűrt fermentlé vagy bármely más, szívglükozidokat tartalmazó oldat, az oldat szívglükozid tartalmára számított 3-20-szoros, előnyösen 10-szeres súlyú aktív szénnel 1-2 órán át kevertetjiik. Ezután Hyflo szupercell vagy szűrőperlit segítségével szűrjük, majd a szénen megkötött glükozidokat megfelelő oldószerrel vagy oldószer keverékkel célszerűen kloroform-alkohol elegyével többször extraháljuk. Az egyesített extraktumok szárazra páriása után nyert maradék további tisztítását végezhetjük kromatográfiás módszerrel vagy pl. előnyösen alkalmazhatjuk e célra a T/24320 számon közzétett magyar találmányi bejelentésben közölt eljárást. Eljárhatunk oly módon is, különösképp magas szívglükozid tartalmú fermentlevek feldolgozásakor, amikor az anyag egy része már a micéliumhoz kötötten, ill. a fermentléből kiválva van jelen, hogy a micélium kiszűrése előtt a fermentlét 10-20 % metanollal vagy etanollal elegyítjük a kivált ill. micéliumhoz kötött glükozid jobb oldódásának elősegítésére, s ezután szűrjük a fermentlevet. Az ezt követő szenes adszorpció mértékét szerves oldószer jelenléte nem csökkenti. Eluáló oldószerként használhatunk bármely vízzel elegyedő vagy nem elegyedő, a szívglükozidokat oldó szerves oldószert vagy ezek elegyét, előnyösen kloroform-metanol 7:3 arányú elegyét. Az elúciót végezhetjük a teljes eluáló oldószermennyiséggel egyszerre, vagy előnyösen annak részleteivel, egymást szűrés közbeiktatásával követő két - hároin elúcióval. A találmány szerinti eljárás legfőbb előnye a tisztán oldószeres extrakciós módszerrel szemben, hogy a jóval kevesebb az oldószerigénye, s ezáltal lecsökkenti az oldószerfelhasználási veszteséget és a bepárlási költséget. Eljárásunk igen nagy előnye az is, hogy a szívglükozidok kinyeréséhez szükséges műveletek egyszerűek. Az eljárás anyagigénye kevés. A hozam eléri vagy meghaladja a közvetlen oldószeres feldolgozásét. A szűrés nagyüzemi berendezésekkel könnyen végrehajtható. Az oldatból a glükozidok tökéletesen adszorbeálódnak. Elkerülhető a nagy mennyiségű oldószer mozgatása. Nem szükséges a nagy térfogatú berendezések igénybevétele. Kiküszöbölhetők az esetleges emulzióképződéssel járó nehézségek. Az aktívszén regenerálás (pl. sósavval) után újra felhasználható. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük. A példákban a glükozidok kvantitatív analitikai meghatározását a 176.249. sz. magyar szabadalmi leírásban közölt dixantil-karbamidos módszerrel végeztük, illetőleg a sztrofantin esetén Hörhammer és munkatársai szerint vékonyTétegkromatografálva (L. Hörhammer, H. Wagner, H. König Deut. Apotheker Ztg. 103 (1963)502.] vizsgáltuk. 1. példa 1 ml metanolban oldott 40 mg lanatozid-A vegyületet, 1 ml tetrahidrofurfurilalkoholban oldott 40 mg digitoxint és 1 ml dimetilformamidban oldott 40 mg digoxint adunk 100 ml vízhez keverés közben. A vizes oldathoz 1 g aktív szenet (REANAL, Budapest) adagolunk és szobahőmérsékleten 2 órán keresztül tovább kevertetjük. Ezután a szuszpenziót MN 640 Wjelű papíron (Macherey-Nagel, DÜREN, Német Szövetségi Köztársaság) kiszűrjük, majd mind a szűrletet, mind a szűredéket kloroform-etanol 7:3 arányú elegyének 30 -30 ml-ével háromszor egymást követően extraháljuk. A megfelelő extraktumokat egyesítjük, és meghatározzuk glükozid tartalmukat. Dixantilkarbamidos módszerrel a szűrletből nem tudtunk glükozidokat kimutatni, míg a szűredék extraktumában 37 mg lanatozid A vegyületet, 38 mg digitoxint és 39 mg digoxint mértünk. 2. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de a szívglükozidokat víz helyett 70 ml víz és 30 ml metanol elegyéhez adjuk. A mérés szerint a szűrlet extraktuma nem tartalmaz glükozidokat, míg a szűredék extraktumában 37 mg lanatozid-A vegyület, 38 mg digitoxint és 39 mg digoxint mértünk. 3. példa 100 mg K-sztrofantint oldunk 100 ml vízben. Az oldathoz 1 g aktív szenet adunk, és 2 óráig kevertetjiik szobahőmérsékleten. Ezután a szuszpenziót MN 640 W jelű papíron szűrjük, a szűredéket kloroformmetanol 7:3 arányú elegyének 10-10 ml-ével háromszor egymást követően extraháljuk. Az egyesített extraktumot bepároljuk, és így 96 mg K-sztrofantint kapunk. 4. példa Streptomyces purpurascens KA-82 jelű (MNG 177) törzs burgonyás-dextrózos ferdeagaron nőtt 1 hetes tenyészetről 10 ml steril vízzel készült szuszpenzió 1 miével oltunk 100 ml MK jelű táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer lombikban. Az MK jelű táptalaj összetétele: 2 % mogyoróliszt 3 % kukoricakeményítő pH 7,0 sterilezés előtt. 121 C°-on 60 percig sterilezzük. A lombikot 32 C°-on rázatjuk percenként 300 fordulatszámú, 2,5 cm kilengésű síkrázógépen 2 napig, majd a tenyészet 5 ml-ével oltunk ugyancsak 100 ml MK jelű táptalajt, mely 1 ml metanolban oldott 100 mg lanatozid-A vegyületet is tartalmaz. 5 nap további rázatás után a fermentlevet szűrővásznon szűrjük, a szűrlethez 1 g aktív szenet adunk és 2 óráig szobahőmérsékleten kevertetjük, majd újra szűrjük. Aszenes szűredéket háromszor extraháljuk 7-7 ml kloroform-etanol 7:3 arányú 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
