184065. lajstromszámú szabadalom • Kromatográfiás réteglap túlnyomásos rétegkromatográfiás berendezésekhez
11 12 11. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de a felhasznált szilikagél mangánnal aktivált cink-szilikátot tartalmaz, mint fluoreszkáló anyagot. 12. példa 20 g 5 um átlagos szemcseméretű cellulózporhoz 100 ml 1,5 %-os magas polimerizációs fokú poliakrilamid diszperziós oldatot elegyítünk, majd 1 percen át homogenizáljuk Waring blendorban. 1,5 mm vastag 20x40 cm alumínium-fóliára 0,20 mm vastag réteget kenünk, amelyet 80 °C-on megszárítunk. A réteget két hosszú oldalán 2 mm szélességben poliakrilamid és polivinil-acetát 1-1 %-os vizes diszperziós oldatával kenjük be, megszárítjuk. A réteglap közepén 1,5 mm széles rovátkolást készítünk, amelytől jobbra és balra 1-1 cm távolságra 15-15 savmentesített fehérje-hidrolizátumokból aliquot mennyiségeket viszünk fel, s a futtatóelegynek használt n-butanol-jégecet-víz 4:1:1 arányú elegyet a csatorna (rovátkolás) közepére vezetjük a lezárt túlnyomásos ultramikro kamrában. A futtatási idő: 52 min, előhívó reagens: 0,2 %-os ninhidrin oldat metanol-ecetsav 80:20 elegyében. Az előhívás hőmérséklete: 90 °C. A viszkózus oldószerelegyet használó rendszer az aminosavakat hatékonyan elválasztja, amelyeket mennyiségileg kromatogram spektrofotméterrel értékeljük. így 8 órás munkamenetben összesen 100-120 fehérjeminta teljes analízisét végezhetjük el. 13. példa 12 g 5 um átlagos szemcseméretű 60 Â belső átmérőjű szflikagélporhoz 24 g ugyancsak 5 um átlagos szemcseméretű üvegport keverünk, amelyet 90 ml benzollal gépesítünk. Ezzel egyidejűleg 2 g 5 um átlagos szemcseméretű 60 Â belső átmérőjű szilikagél porhoz 8,0 g üvegport adagolunk, a keveréket 30 ml benzolban pépesítjük. A két pépet 5 db 20x20 cm méretű 2,5 mm vastag üveglapra (amely azonos minőségű, mint a felhasznált üvegpor!) térben és hosszban arányosan elválasztott kenővályú segítségével kenjük úgy, hogy a két szemben lévő szélén 10-10 mm szélességben lesz az üvegben dusabb pép. A szikkadt, oldószermentesített réteglapot 690 °C körüli hőmérsékletre elektromos kemencébe helyezzük, s ott tartjuk 8 percen át. A kivett, zsugorított réteget hordozó lapokat óvatosan hűtjük, s használjuk kétirányú túlnyomásos rétegkromatográfiás futtatáshoz. Futtatónak metilén-kloridot használunk, míg a középső oldószer-bevezetés helyén egy 2 mm széles 175 mm hosszú poli-terektalát lemezt fektetünk, s két oldalra pedig az 1. példában használt színanyag-keverék aliquot mennyiségeit visszük. A pámanyomás a túlnyomásos kamrában 1,0 MPa, futtatási idő pedig 7,5 min. Hasonló éles felbontást kapunk, mint az 1. példában. 14. példa 22 g 8 um átlagos szemcseméretű, kémiailag módosított (C18) szilikagélhez 120 ml 2,2 %-os poli-vinil-acetát vizes oldatát adjuk, s 1 percig Waring blendorban pépesítjük. A pépet szokásos módon 5 db 20x20 cm méretű 2,0 mm vastag üveglapra kenjük. A rétegeket 80 °C-on megszárítjuk. Az így kapott C18 kémiailag kötött álló fázissal rendelkező rétegen ./ordított fázisú” elválasztást végzünk. A vizsgálandó vegyületek: mák-alkaloidok. Futtató: acetonitril - 0,005 M KH2P04 4:6 arányú elegye. A külső párnanyomás a túlnyomásos ultramikro kamrában: 1,2 MPa. Futási idő: 40 min. Futási távolság: 16 cm. A folyadék-szilárd (adszorbciós) rendszerekkel szemben itt a mák-alkaloidok sorrendje a rétegen megfordul, legnagyobb Rf értékkel a morfin, kodein, tebain stb. így a mák-alkaloidok elválasztására az eddigi módszerekkel szemben más elrendezésű sorrendet adó módszerhez jutunk. 15. példa 23 g kaolinhoz annyi vizet adagolunk, hogy jól alakítható, formázható péphez jussunk. Ebből a pépből 5x20 cm-es fémből készült formázóban 3 mm vastag réteget alakítunk ki, amit hagyunk megszáradni. A száradt réteg szemben lévő széleit 3 mm szélességben ólom-mázzal kenjük be, majd a lapot 1200 °C-os elektromos kemencébe helyezzük. Az így nyert kerámia-lapon túlnyomásos ultramikro kamrában, 1,2 MPa külső pámanyomás mellett kétirányú futtatást végzünk. A réteglap közepén az oldószerbevezetés helyén át 1,5 mm széles poli-tereftalát lapocskát fektetünk, s két oldalt 1,5-1,5 cm-re 2-2 színanyag-keverék mintát csepegtetünk (4. ábra). Oldószernek: széntetrakloridot használunk, amellyel a színanyagok hatékony elválasztását érjük el. Szabadalmi igénypontok 1. Kromatográfiás réteglap túlnyomásos rétegkromatográfiás berendezésekhez egyszeri, vagy többszöri lineáris kromatogram kifejlesztésére azzal jellemezve, hogy a 0,5-50 um szemcseméretű célszerűen szűk szemcseméret tartományú szorbenssel önmagában ismert módon kent szorbens réteglap legalább két szélén (17) 0,05-3, célszerűen 0,05-0,3 cm szélességben záróréteg van kialakítva és az oldószer bevezetésére szolgáló helyen (19), vagy annak közelében, valamint a minta felviteli helyen(ken) (18), vagy mögötte, a szorbensrétegben egy, vagy több 0,1-5 mm széles szorbens mentes sáv van kialakítva, vagy az említett helyeken egy, vagy több terelőlap, vagy huzal van elhelyezve és kivánt esetben az oldószer bevezetés felőli részen önmagában ismert módon kialakított koncentráló zónával van ellátva. 2. Az 1. igénypont szerinti réteglap kiviteli alakja 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
