184041. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükopiranozil-peptidek előállítására
184 041 (2 x 500 ml). Vékonyréteg kromatográfiás vizsgálattal kiválasztjuk a megfelelő frakciókat, (kloroform metanol 5:1 arányú elegyével eluálunk szilikagélen), a frakciókat betöményítjük, kétszer liofilizáljuk ecetsavas oldatból, 659 mg-ot kapunk (hozam: 89 %). [«U = + 67,5° (c: 0,5 jégecet). talált értékek: C % 53,3 - H % 6,3 - N % 6,8. C34H50O14N4,1,5 CHjCOOH képletre számítva: C% 53,6 -H% 6,8 -N%6,8. 23 c) Eljárás 6-O-szukrínil-N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamin-n-butil-észter előállítására 412 g eC-benzil-6-O-szukcinil-N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamin-n-butil-észtert (0,542 mmól) 25 ml jégecetben oldunk, az oldatot gyenge nyomás alatt hidrogénezzük 40 óra hosszat 200 mg, 10 % palládiumot tartalmazó aktív szénen. A katalizátort ezután leszűqük, a szűrletet betöményítjük, szirupszerű terméket kapunk, amit szilikagéllel töltött oszlopon tisztítunk etilacetát-piridin-ecetsav-víz 6:2:06:1 arányú elegyével. Vékonyréteg kromatográfiás vizsgálattal kiválasztjuk (szilikagélen, kloroform-metanol 2:1 arányú elegyével eluálva) a megfelelő frakciókat, ezeket egyesítjük, betöményítjük, liofilizáljuk. 269,6 mg terméket kapunk, (hozam: 81 %). A kapott anyagot vízben felvesszük, majd AG 50 W x 2 oszlopon (13 x 1,5 cm) kromatografáljuk, eluálószerként vizet alkalmazva. A kívánt frakciókat liofolizálva 217 mg-ot kapunk. Mű = + 33,1° (c = 1, jégecet). talált értékek: C % 48,8 - H % 6,6 - N % 8,5. C27H44014N4,0,75 H20 képletre számított értékek: C % 48,9 - H % 6,9 - N % 8,5. Farmakológiái tulajdonságok 1. Toxicitás A találmány szerinti vegyületek toxicitását nyulakon, a vegyületek parenterális beadása útján vizsgáljuk. A találmány szerinti vegyületek toxikus dózisa egy nagyságrenddel nagyobb, mint az a dózis, ahol a vegyületek hatása jelentkezik. Ennek következtében a vegyületeket az állatok jól tűrik legalább 5 mg/kg testsúly/állat dózisban is. 2. Pirogenitás vizsgálata A nyulakon végzett vizsgálatok során a beadást követő 3 óra alatt mérhető maximális hőmérséklet-eltérést feljegyezzük. 5 mg/kg dózis beadása esetén számottevő hőmérséklet-változás nem volt észlelhető. A különféle Mur-NAc-L-Ala-D-Gln észterek beadása nyomán az átlagos hőmérséklet-emelkedés az alábbi volt: 2. Táblázat Pirogén vizsgálatok eredménye Pirogénitási vizsgálat eredménye A © dózis (°C) mg/kg 24 (a) MDPG-0-nC4H9-10 (b) MDG-OCH3-10 (c) MDPG-O-nC10H21 0,23 10 (d) MDPG-0-nC3H7 0,07 10 (e) MDPG-0-nC6H13 0,13 10 (0 mdpg-o-íc4h9 0,07 10 (g) mdpg-oc2hs 0,03 10 (h) MDPG-0-nCsHn 0,03 10 (0 6-O-szukcinil-MDPG-0-nC4H9 0,23 1 <j) MDPG [Val]-0-nC4H9 0,23 1 00 MDPG [Ser]-0-nC4H9 2 0,3 MDP (ismert) 1,1 1 MDPA (ismert) 2,3 3 0) MDPA [Gly]-0-n-C4H9 0,13 10 MDPG = N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamin (ez esetben az (I) általános képletben X = L-alanin) MDP = (VII) képlettel jellemezhető ismert vegyület, MDPA = (VIII) képlettel jellemezhető ismert vegyület, Fentiek alapján megállapíthatjuk, hogy a vizsgált vegyületeket hatásos dózisban adva, azok teljes mértékben pirogénmentesek. 3. Vizes fázisban észlelhető adjuváns hatás vizsgálata Pa alább következő vizsgálatok során a találmány szerinti vegyületeknek adjuváns hatását az anti-albumin-antitest vizsgálatok segítségével értékeljük. Két hónapos svájci egerek 8-as csoportjait szubkutan injekcióval kezeljük. Az állatoknak 0,5 mg boíjúszérum albumint (BSA) adunk izotóniás sóoldatban, a vizsgált anyag hozzáadásával, ill. anélkül. Az antigén anyag e dózisa semmilyen vagy igen gyenge választ vált ki a kontroli-állatokban. Ehhez a reakcióhoz képest az adjuváns anyag hatásossága jól értékelhető. 30 nappal a fenti kezelés után az egereknek fenti antigénből 0,1 mg-ot adunk be emlékeztetőként. Összehasonlításképpen a találmány szerinti vegyületek hatását a 2-(2-acetamidodezoxi-3-0-D-glukopiranozil)-D- propionil-L-alanil-D-izoglutamin (MDP) hatásához viszonyítjuk. Az antitest szintet passzív hemaglutináció segítségével 13 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
