183579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L-arginil-L-lizil-L-aszparagil-L-valil-L-triozin pentapeptid előállítására
1 183 579 2 1. lépés N-Benziloxikarbonil-L-valil-L-tirozin-metilészter 12,55 g (50 mmól) Z-Val-OH-t és 11,60 g (50 mmól) H-Tyr-OMe-HCl-ot 170 ml kloroformban szuszpendálunk 7,0 ml (50 mmól) trietil-amin jelenlétében. A szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük, és hozzáadunk 10,3 g (50 mmól) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet másnapig szobahőmérsékleten keverjük, a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és kétszer 50 ml 1 mólos kloroformmal mossuk. A kloroformos oldatot kétszer 100 ml 1 mólos sósavoldattal, 100 ml vízzel, kétszer 100 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd 100 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot 200 ml etil-acetátban oldjuk melegen. Fél óra múlva a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot petrol-éterrel megszilárdítjuk. 18,37 g (86%) Z-Val-Tyr-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 145—147 °C, Rf 0,70, [a]f>°= + 8,38° (c—1,0 piridin). 2. lépés N-Benziloxikarbonil-L - valil-L-tirozin 26,4 g (61,6 mmól) Z-Val-Tyr-OMe-t (1. lépés) 150 ml metanol és 50 ml víz elegyében 6,0 g (150 mmól) nátrium-hidroxiddal reagáltatunk. Egy óra után a reakcióelegyhez 100 ml vizet adunk, a metanolt vákuumban elpárologtatjuk és a vizes oldatot tömény sósavval pH 3-ra savanyítjuk. A kivált anyagot kiszűrjük, és vízzel alaposan mossuk. 24,0 g (94%) Z-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 158— 160 °C, Rf 0,50, [a]f>°—h32,0o (c= 4, piridin). 3. lépés N-Benziloxikarbonil-L-aszparagil-fi-terc-butilészter-.L-valil-L-tirozin 32,0 g (77,2 mmól) Z-Val-Tyr-OH-t (2. lépés) 300 ml ecetsavban oldunk, és 3,5 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátor jelenlétében keverés közben átbuborékoltatással hidrogénezünk. A reakció három órán belül teljessé válik. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot 150 ml metanolból kristályosítjuk, majd leszűrjük. 19,8 g (90,7%) H-Val-Tyr-OH-t kapunk, Rf 0,45, [a]r>°-= + 47,7° (c—1,01 piridin). Az előzőekben kapott szabad dipeptidet 150 ml vízmentes dioxánban szuszpendáljuk, és 9,85 ml (70,5 mmól) Z-Asp(0‘Bu)-0Su-rel reagáltatjuk. Másnap a tiszta oldatot vákuumban bepároljuk 100 ml-re, és a maradékot 300 ml 10%-os vizes ecetsavval meghígítjuk. A leváló olaj kapargatásra megszilárdul. A nyersterméket kiszűrjük, vízzel alaposan átmossuk, majd 250 ml metanollal felforraljuk. Másnap a szuszpenziót szűrjük, a csapadékot 100 ml 80%-os metanollal mossuk. 35,7 g (79% a Z-Val-Tyr-OH-ra számítva Z-AspfO'Buj-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja 210—212 °C, Rf 0,65, [a]f>°=0 (c-1, dimetilformamid), [a]f?= —3,0° (c^l.Oó, dimetil-szulfoxid). 4. lépés N-a-Benziloxikarbonil-N-e-terc-butiloxikarbonil--L-Iizil-L-aszparagil-fi-terc-butilészter-L-valil-L-tirozin 35,4 g (60,3 mmól) Z-Asp(0'Bu)-Val-Tyr-OH-t (3. lépés) 500 ml ecetsavban szuszpendálva 3,6 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátor jelenlétében, keverés közben, átbuborékoltatással hidrogénezünk. Két óra elteltével a csapadék oldódik, a reakció teljessé válik. A reakcióelegyből a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 100 ml vízzel kristályosítjuk, és a szuszpenziót másnapig hűtőszekrényben tartjuk. A terméket leszűrjük és jéghideg vízzel mossuk. 25,4 g H-Asp(0'Bu)-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 168—170 °C, Rf 0,30, [a]r?= — 2,7° (c=0,74, dimetil-formamid, [a]f?—h21,7° (c-1, ecetsav). Az előzőleg kapott szabad tripeptidet 200 ml vízmentes dioxánban 7,87 ml (56,1 mmól) trietilamin hozzáadása után 26,8 g (56,1 mmól) Z-Lys(Boc)-OSu~val reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot 500 ml kloroformban oldjuk és az oldatot háromszor 100 ml 1 mólos sósavoldattal, 100 ml vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízmentes éterrel megszilárdítjuk. 35,2 g (71,3%) Z-Lys(Boc)-Asp(0‘Bu)-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 152—157 °C, Rf 0,70, [a]ÿ-----10,3° (c“0,99 ecetsav). 5. lépés N-terc-Butiloxikarbonil-L-arginil-ó-hidroklorid--N-E-terc-butiloxikarbonil-L-lizil-L-aszparagil-ß -terc-butilészter-L-valil-L-tirozin 30,5 g (37,5 mmól) Z-Lys(Boc)-Asp(0'Bu)-Val-Tyr-OH-t (4. lépés) 300 ml ecetsavban 3,0 g 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátor jelenlétében keverés közben átbuborékoltatással hidrogénezünk. 2 óra alatt a reakció teljessé válik, ekkor a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot 100 ml vízzel kristályosítjuk. A szuszpenziót másnapig hűtőszekrényben tartjuk, majd szűrjük. 23,1 g (H-Lys(Boc)-Asp(0‘Bu)-Val-Tyr-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 195—197 °C, Rf 0,10, [a]f)n= + I,80 (c—1, ecetsav), [a]f>°—— 7,6° (c=0,99, dimetilformamid). 11,15 g (34 mmól) Boc-Arg(OH-HClH20-ot 100 ml dimetil-formamidban oldunk. Az oldathoz hozzáadunk 4,76 ml (34 mmól) trietil-amint, majd az elegyet —10 °C-ra hűtjük és hozzácsöpögtetünk 4,13 ml (34 mmól) pivaloil-kloridot —10 °C-on. A vegyes anhidridet 10 percig —10 °C-on keverjük, majd ezen a hőmérsékleten hozzácsöpögtetjük a 20,4 g (30 mmól) H-Lys(Boc)-Asp(0'Bu)-Val-Tyr-OH 100 ml dimetilformamiddal készült oldatát. A reakcióelegyet 30 percig 0 °C-on keverjük, majd 4 órán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A szuszpenziót vákuumban bepároljuk, a maradékot 300 ml kloroform és 100 ml metanol elegyében szuszpendáljuk és háromszor 50 ml hideg 0,1 mól/1 koncentrációjú sósavoldattal mos-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
