183456. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dibenzoxazepinek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

1

183 456

percig tartó inkubáiás után az elegyhez 1 x KE4 * M, 1,5 x 10~3 M és 1 x KE6 * M koncentrációban arachidonsavat, kollagént és adenozin-difo'szfátot (ADP) adagoltunk a trombociták aggregálására. Az aggregációs ,'• szintet, aggregométerrel határoztuk meg. CORNINGELL MODEL 16P-t használtunk (Evans Electro Selezalékát az alábbi egyenletből számítottuk ki:

Gátlási százalék =

1-a teszt-vegyület által N mulatott aggregációs szint dimetil-szulfid aggregációs szintje

líJO

nium.Ltd. gyártmánya) és a trombociták gátlási szá- Az eredményeket a 3.

3. táblázat (la) képletű vegyület

láblázat mutatja.

Vegyület

Aggregáció-gátlási százalék

Szám R|

l<2

r3 ■ ■

arachidonsav kollagén

ADP

1

aszpirin

100

8

17

1. 3-CHj-C2F15-c

2h5

60

47

50

2. 3-OCH3-c

2h5

—ch

3

63

50

45

3. 3-CH3-c

2h5-CHj

55

43 ’

,50

4. 4—CHj-c

2fi5-CHj

60

48 '

51

5. 4-OCH3-c

2h5-CH,

45

30

35

6. 4-OCHj-C2I-I5

H

40

■ ■ 25

20

7. 4-OCH,-CÉL

H

38

34

36

8. 4-OCHj-C3H7

H

42

40

•43

9. 4-OCHj-C4H9

H

43

37

35

10. 2,4—(—OCH3)2-c2h5

OH5

52

47

44

11. 2-OCH3-c

2h5

— CH = CH—Ph

48

45

46

12. 3-OCH3-c

2h5-Ph

50

43

40

13. 3-OCHj

c2

h5

m— CH3.C6H4—

45

41

3*)

14. 3-CH3

c2

h5

c3

h7

60

50

47

4. táblázat

(la) képletű vegyület

Vegyület

Relativ PC1

I2 termelés %

Relativ ix As termeles ü/o

Szám Rj

K2

1^3

imidazol

1

3,0

0,25

aszpirin

0,1

0,1

1. 4-CHj

H

H

1,5

0,1-2. H

H

H

1,3

0,1

3. 3-OCH3

H-CH,

3,5

0,35

4. 3-CHj

H-c

2h5

7,0

0,25

5. 3-CHj

H-CHj

4,7

0,45

6. 3-OCH3

H

—c

2h5

3,7

0,3

7. 2-Cl

H

H

1,8

0,15

8. 4—OC2H5

H

H

2,5

0,2

9. 2-CH3

H

H

3,1

0,35

4. kísérlet

5x104 M teszt-vegyület oldatát hozzáadjuk 1 ml 50 0,9 mg sertésaorta-mikroszomák és 9x 108 * * * * * SD törzsű

patkányok trombocitáinak elegyéhez. Az elegyhez 10 //l, az 1-es szénatomon jelzett (C14) arachidonsav (80

nM, 4,7 Ci/mól) 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonátos vizes oldatát adjuk és 3 perces reakció után 23 55

C°-on a reakció befejezésére 50/ti 0,5 M citromsavas

vizes oldatot adunk. A reakcióelegyhez 8 ml etilacetátot adunk és rázzuk. A szerves réteget vákuumban szárazra pároljuk és a maradékot feloldjuk 100//I etilacetátban és az oldatot szilikagél üveglemezek al- 60

kaítnazásáva! vékonyrétegkromatografálásnak vetjük alá. Előhívószerként 5:11:2:10 arányú izooktán: etilacetát : ecetsav: víz felső rétegét használjuk.

Az előhívás befejezése után a lemezt megvizsgáljuk

radioaktivitás szempontjából és a tromboxán B2 és 65

6-keto-prosztaglaiidin Fia radioaktív sávjainak megfelelő területen a szilikagélt lekaparjuk és a radioaktivitást folyadék-szcintillációs számlálóval határozzuk meg. Kiszámítottuk az arachidonsav tromboxán IL-vé vagy 6-keto-prosztaglandin Fia-vá alakulásának konverziós fokát és meghatároztuk a tromboxán B, és a 6-keto-prosztaglandin F,a mennyiségét.

A fent leírt feltételek között valamenny: TXA, és PG12 átalakult TXB2-vé és 6-keto-PGF,a-vá. így feltételezhető, hogy a TXB2 és a 6-keto-PGFi« mennyiségei megfeleltek a reakciórendszerben képződött TXA2 és PGL mennyiségének.

Az eredményeket a 4. táblázat mutatja, ahol az adatokat a teszt-vegyületeket nem tartalmazó mintákban található tromboxán B2 és 6-keto-pros taglandin Fi« mennyiségeihez viszonyítottunk. Kontrollként imidazolt és aszpirint tartalmazó mintákat használtunk.

4