183192. lajstromszámú szabadalom • Javított eljárás korrinoidok CO-béta-helyzetű helyettesítőt hordozó származékainak előállítására
1 183 192 2 végterméket kapunk, csupán kis mennyiségű szenynyezés keletkezik, ennek eltávolításához nincs szükség ioncserélő oszlopokon vagy előzetesen aktivált dietilaminoetil- vagy karboximetilcellulóz-oszlopokon végzett kromatografálásokra. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük. 1. példa 500 ml-es, négynyakú, csiszolatos gömblombikba bemérünk 5,0 g kristályos cianokobalamint, majd hozzáadunk 100 ml desztillált vizet és 2 ml 40 %-os vizes formaldehid-oldatot. A lombik csiszolataiba csepegtetőtölcsért és két csapos csatlakozót, amelyek közül az egyik hosszú-, a másik rövidszárú, a negyedik csiszolatra pedig kisméretű gumiballont illesztünk. A mágneses keverés beindítása után a rendszert vákuummal leszívatjuk, majd a hosszúszárú csatlakozón keresztül argongázzal feltöltjük. Ezt a műveletet még két alkalommal megismételjük, majd a rövidszárú csatlakozót desztillált vízzel töltött gázmosó palackhoz kapcsoljuk. Ezután a keverékhez a csepegtetőtölcséren keresztül 2 g, 10 ml desztillált vízben feloldott nátrium-bórhidridet adunk. Gyors felhabzás és pezsgés után a kristályos keverék rubinvörös színe előbb barnába, majd zöldeskékbe vált át. Ettől kezdve minden műveletet csak gyenge, szórt fényben végzünk. Egy órán át tartó keverés után - ügyelve arra, hogy a rendszerbe levegő ne jusson - a kristálymentes oldathoz újabb 0,5 g, 5 ml desztillált vízben feloldott nátrium-bórhidridet adunk. Az elegyet 15 percen át tovább keverjük, majd hozzáadunk 10 ml, 1 ml metil-jodidot tartalmazó metanolt. Ekkor az oldat színe zöldeskékből hirtelen pirosba vált át. 20 perc múlva további 3 ml, 0,5 ml metil-jodidot tartalmazó metanolt adunk az elegyhez a reakció teljessé tétele céljából. 20 percen át tartó keverés után az elegybe lassú ütemben 12-15 ml 10 %-os vizes sósav-oldatot csepegtetve az elegy pH-ját 6-ra állítjuk. A hidrogénfejlődés megszűnése után a pH-értéket ellenőrizzük, majd a lombik tartalmát desztillált vízzel rázótölcsérbe átmossuk. A kapott, körülbelül 200 ml térfogatú oldatban feloldunk 10 g kristályos fenolt, majd egymást követően 75, 50 és 25 ml 1:1 térfogatarányú fenol-kloroform eleggyel kirázzuk. Az egyesített szerves fázist azonos térfogatmennyiségű desztillált vízzel átmossuk és a fázisokat elválasztjuk. A szerves fázishoz ezután 150 ml acetont, 60 ml desztillált vizet és 500 ml kloroformot adunk, majd az újra elválasztott szerves fázist további 25 ml desztillált vízzel kirázzuk. Az egyesített vizes fázishoz 10-szeres térfogatmennyiségű acetont adunk, és szobahőmérsékleten éjszakán át kristályosodni hagyjuk. Ezután a tűs kristályokat zsugorított üvegszűrőn leszúrják és 60 “C-on 10 % nedvességtartalom eléréséig szárítjuk. így 4,92 g nyers metilkobalamint kapunk, amelyet az alábbi módon átkristályosítunk. 20,0 g nyers metilkobalamint feloldunk 500 ml, 40-50 °C hőmérsékletű, 20 térfogatszázalék etanolt tartalmazó desztillált vízben. Az oldathoz 10 g száraz súlyra számolt előzőleg aktivált és semlegesre mosott dietilamino-etil-cellulózt adunk. 15-20 percen át tartó keverés után a körülbelül 45 °C hőmérsékletű elegyet porcelán szűrőn, vízsugárszivattyúval előállított vákuumban papírszűrőn leszűrjük. A szűrőn maradt cellulózt körülbelül 45 °C hőmérsékletű, 20 térfogatszázalék etanolt tartalmazó desztillált vízzel addig mossuk, amíg az átfolyó mosófolyadék színtelen nem lesz. A szűrlethez 10 g száraz súlyra számolt előzőleg aktivált és semlegesre mosott karboxi-metil-cellulózt adunk, és az elegyet ugyanúgy kezeljük, mint a dietil-amino-etil-cellulóz hozzáadása után, végül a kapott tiszta oldatot rotációs bepárlóban, 40 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten körülbelül 300 ml térfogatra bepároljuk, majd éjszakán át 17-22 °C hőmérsékleten kristályosodni hagyjuk. Ezután a kristályokat zsugorított üvegszűrőn leszűrjük, acetonnal mossuk és először levegőn, majd 60 °C-on, szárítószekrényben 10 % nedvességtartalom eléréséig szárítjuk. így 15,2 g és az anyalúg bepárlásával további 4,12 g kristályos metilkobalamint kapunk, amelynek hatóanyagtartalma extinkciómérés alapján 99,4 %. Szennyezések (a BP 73 gyógyszerkönyv módszerei szerint meghatározva): cianokobalamin-tartalom : 0 %, savas szennyezés 0,3 %, szabad hidroxokobalamin-tartalom: 0,6 %. K termelés: 98,6 %. 2. példa 500 ml-es, négynyakú, csiszolatos lombikba bemérünk 5,0 g kristályos cianokobalamint, majd hozzáadunk 100 ml 1:1 térfogatarányú metanoldesztillált víz elegyet és 2 ml 40 %-os vizes formaldehid-oldatot. A redukálást az 1. példában leírt módon végezzük 2 g, 10 ml desztillált vízben feloldott, majd újabb 0,5 g, 5 ml desztillált vízben feloldott nátrium-bórhidrid beadagolásával. A második nátriumbórhidrid mennyiség beadagolása után az elegyet 15 percen át keverjük, majd hozzáadjuk az alábbi módon készített reagenst. 2,5 g, 0,1 %-nál alacsonyabb nedvességtartalmú adenozinból frissen készített 5 '-O-mezil-2 ',3 '-izopropilidén-adenozint gömblombikban gyantasűrűségűre párolunk, majd hozzáadunk 65 ml 1:1 térfogatarányú metanol-0,3 n sósav-oldat elegyet, majd a reakcióelegyet 30 percen át forraljuk visszafolyató hűtő alkalmazásával. Ezután gyorsan szobahőmérsékletre hűtjük, pH-ját 2 n nátrium-hidroxid-oldattal 7,2 és 8,2 közé állítjuk, majd lassan hozzácsöpögtetjük a fenti módon készített, zöldeskék színű, hidrido-kobalamint tartalmazó elegyhez. A beadagoláskor az elegy színe hirtelen pirosba vált át. A reakcióelegyet további 45 percen át keveijük, majd pH-ját 10 %-os vizes sósav-oldattal 6,0-ra állítjuk és a metanolt 40 °C alatti hőmérsékleten vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot 1:1 térfogatarányú fenol-kloroform eleggyel extraháljuk, a szerves fázist desztillált vízzel mossuk és sómentesítjük, a termék ily módon újra a vizes fázisba kerül és folyamatos acetonadagolással kikristályosítjuk, éjszakán át 0 és 5 °C közötti hőmérsékleten állni hagyjuk. Ily módon 5,4 g nyers Bi- vitamin koenzi-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
