183115. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Candida Guilliermondii-fertőzés kimutatására, megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmas immunbiológiai készítmények előállítására
1 183 115 2 A tenyészetet visszahelyezzük a rázógépbe, és 6 órán keresztül 37 °C-on, 130 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Ezután a tenyészetből mintát veszünk, és a gomba életképességét Sabouraud dextróz agarra történő leoltással ellenőrizzük (a lemezeket 48 órán át 37 °C-on inkubál- 5 juk). A tenyészetből Gram-festéshez mintát veszünk. Amennyiben a minta festődik, ez baktériumszennyezések jelenlétére utal; ekkor a tenyészetet nem használhatjuk fel immunbiológiai készítmény előállításához. Ha az elvégzett vizsgálat szerint a tenyészet nem tártál- 10 máz baktériumszennyezést, a lombik tartalmát 10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A szilárd anyagként kapott teljes sejteket steril élettani konyhasó oldattal háromszor mossuk, centrifugáljuk (10 percig 1000 fordulat/perc sebességgel) és kb. 2,5 gr 15 nedves sejtmasszát nyerünk. 1 térfogatrész így kapott nedves sejtmasszához 3 térfogatrész steril élettani konyhasó oldatot adunk. Az oldathoz kereskedelmi minőségű Merthiolat (Nátrium-etilmercuri-tio-szalicilát) oldatot adunk olyan mennyiség- 20 ben, hogy a végső koncentráció 1:10 000 legyen, és a kapott sejtszuszpenziót +4 C-on tároljuk. Immunbiológiai készítményt kapunk, amit a laboratóriumi diagnosztikában a csőagglutinációs és az indirekt fluoreszcens vizsgálatokhoz használhatunk fel, vagy ABR (Abortus-Bang- 25 Ringprobe) típusú próbához szükséges festett antigén előállításához (Hutyra, F., I. Marek, R. Manninger, I. Mocsy: Spezielle Pathologie und Therapie der Haustiere.VEB. Gustav Fisher Verlag. Jena. 1959.) A jelen találmány szerinti eljárások segítségével kimu- 30 tatható a Candida guilliermondii fertőzöttségnek mértéke, megoldható a rendszeres preventív szűrés, immunizálás. Csak a fertőzött egyedek szaporodásbiológiai vonatkozású kiszűrése az állományokban komoly tartási, takarmányozási és egyéb költségmegtakarítást biztosít 35 a gazdaságoknak. Mivel az ember is fogékony a fertőzés iránt — a diagnosztikai szűrővizsgálatoknak közegészségügyi és élelmiszerhigiéniai jelentősége is van. Mindezek a diagnosztikai és immunizálásra alkalmas anyagok humán vonatkozásban is érvényesek. 40 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Candida guilliermondii-fertőzés kimutatá- 45 sára, megelőzésére és/vagy kezelésére alkalmas immunbiológiai készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24—42 °C-on, előnyösen 32—38 °C-on a gomba 50 által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó táptalajon végzett tenyésztéssel elszaporítunk, majd a kapott populációt vagy populációkat azonos körülmények között fenntartjuk, meghosszabbított tenyésztés céljából, ezután a gombasejteket elkülönítjük a tenyészettől, mossuk, előnyösen élettani konyhasó oldattal, mechanikai úton feltárjuk, előnyösen élettani konyhasó oldattal extraháljuk, az extraktumot szerves oldószerrel, előnyösen alkohollal, még előnyösebben etanollal kezeljük, és a kapott csapadékot — adott esetben további tisztítás után — immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk; vagy b) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24^42 °C-on, előnyösen 32-38 °C-on a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó táptalajon 48—72 órán át tenyésztünk, adott esetben 2—3 újabb populáció előállításáig tovább szaporítjuk, majd a gombasejteket elkülönítjük a tenyészettől, mossuk, előnyösen élettani konyhasó oldattal, mechanikai úton feltáquk, előnyösen élettani konyhasó oldattal extraháljuk, majd kívánt esetben az extraktumhoz szerves oldószert, előnyösen alkoholt, még előnyösebben etanolt adunk, a kapott csapadékot pedig — adott esetben további tisztítás után — immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk; vagy c) Candida guilliermondii-törzset aerob körülmények között, 24—42 °C-on, előnyösen 32—38 °C-on a gomba által asszimilálható szénforrást és nitrogénforrást tartalmazó folyékony vagy szilárd táptalajon 48—72 órán át tenyésztünk, majd a tenyészetet elöljük, az elölt sejteket elkülönítjük, végül immunbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk. (1980. 03. 03.) 2. Az 1. igénypont szerinti bármelyik eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az immunbiológiai készítményeket a humán-, az állatgyógyászatban alkalmazható formában készítjük ki, az a) és b) eljárások esetében előnyösen allergen, oldódó antigén, oltóanyag, a c) eljárás esetében előnyösen korpuszkuláris antigén formájában. (1980.03. 03.) 3. Eljárás a Candida guilliermondii-fertőzés laboratóriumi kimutatásában reagensként alkalmazható, nagy precipitin-tartalmú vérsavó előállítására, azzal jellemezve, hogy nyulakat standard módon az 1. igénypont szerinti a) eljárással előállított immunbiológiai készítménnyel immunizálunk, majd az állatokat elvéreztetjük, és az állatok vérsavóját ismert módon elkülönítjük. (1981.01.14.) 4. Eljárás a Candida guilliermondii-fertőzés laboratóriumi kimutatásában reagensként alkalmazható, nagy aggluti rin-tartalmú vérsavó előállítására, azzal jellemezve, hogy nyulakat standard módon az 1. igénypont szerinti b) vagy c) eljárással előállított immunbiológiai készítménnyel immunizálunk, majd az állatokat elvéreztetjük, és az állatok vérsavóját ismert módon elkülönítjük. (1981.01. 14.) Ábra nélkül 7
